[发明专利]鸭肝炎Ⅰ型病毒间接血凝诊断抗原的制备及试剂盒

摘要

本发明涉及一种鸭肝炎I型病毒间接血凝诊断抗原的制备方法，具体涉及一种通过鸭肝炎I型病毒抗原致敏双醛化绵羊红细胞制备间接血凝诊断抗原的方法。本发明的方法生产的鸭肝炎I型病毒间接血凝诊断抗原保存时间长，可达半年；而且缩短了诊断时间，仅需要半个小时，使用方便简单，适于在实际生产中的推广与应用。

主权项

一种鸭肝炎I型病毒间接血凝诊断抗原的制备方法，包括以下步骤：(1)双醛化绵羊红细胞的制备：取质量百分比浓度为8％绵羊红细胞悬液1重量份，边搅拌边滴加质量百分浓度为3％丙酮醛1重量份，24～26℃搅拌反应15～18小时，3000r/min离心15～20分钟，弃上清，红细胞用PBS溶液洗涤，用PBS溶液配制成质量百分比浓度为8％的红细胞悬液；取上述红细胞悬液1重量份，边搅拌边滴加质量百分浓度比为3％甲醛溶液1重量份，24～26℃搅拌15～18小时，3000r/min离心15～20分钟，取红细胞用PBS溶液洗涤，用PBS溶液配制成质量百分比含量为8％的红细胞悬液，每100毫升质量百分比含量为8％的红细胞悬液中添加0.2克的叠氮钠；(2)双醛化红细胞的鞣酸化取质量百分比含量为8％的双醛化红细胞40毫升，用pH7.0，0.01mol/LPBS溶液洗涤，加入体积为质量百分比含量为8％的双醛化红细胞溶液的5倍的pH7.0，0.01mol/L PBS溶液，混匀后搅拌，加热至37℃，加入体积为质量百分比含量为8％的双醛化红细胞溶液1.25倍的质量体积比为0.01％的鞣酸溶液，全部加完后搅拌30～60分钟，离心，弃上清，红细胞泥用0.15mol/L，pH 6.4的PBS洗涤，离心后在沉淀物内加入体积为质量百分比含量为8％的双醛化红细胞溶液的3.925倍的0.15mol/L，pH 6.4的PBS即为2％的双醛化鞣酸化红细胞；(3)鸭肝炎I型病毒抗原致敏双醛化鞣酸化绵羊红细胞：将鸭肝炎I型病毒抗原贮存液用0.15mol/L、pH为6.4的PBS溶液稀释10倍，将稀释后的鸭肝炎I型病毒抗原溶液加入2倍体积的质量百分比浓度为8％双醛化鞣酸化红细胞悬液，充分混合，37℃水浴致敏60～90分钟，1500r/min离心10～15分钟，沉淀加3倍体积的质量百分比浓度为0.25％的血清白蛋白悬浮，37℃水浴30～60min，1500r/min离心10～15min，沉淀用 0.15mol/L、pH为6.4的PBS溶液洗涤，加入体积为鸭肝炎I型病毒抗原储存液160倍的0.01mol/L、pH为7.0的PBS溶液，即成鸭肝炎I型病毒间接血凝诊断抗原。