[发明专利]一种微囊藻毒素-LR定量快速检测传感器的制备及应用

摘要

一种微囊藻毒素-LR定量快速检测生物传感器的制备及应用，属于生物技术领域。该检测传感器为阻抗型电化学传感器，由CHI760C型电化学工作站，三电极体系：免疫电极为工作电极，饱和甘汞电极为参比电极，铂丝电极为对电极组成；将L-半胱氨酸，胶体金，微囊藻毒素抗体复合物分别包被于裸金电极表面作为工作电极；当微囊藻毒素抗体与样液中的抗原(MC-LR)结合时将引起参比电极与工作电极之间电势差的变化，与样品中抗原浓度呈定量关系，以此进行微囊藻毒素的检测；成功建立了快速、特异、灵敏的检测微囊藻毒素抗原的生物传感器；检测线性范围：0.05～300ng/mL，检出限1.82×10^-2ng/mL。既可以对天然湖泊水进行实时监测，又可以对水厂饮用水的制备过程进行实时监控。

主权项

1、一种微囊藻毒素-LR定量快速检测传感器的制备方法，其特征是该检测传感器为阻抗型电化学传感器，由CHI760C型电化学工作站，三电极体系：免疫电极为工作电极，饱和甘汞标准电极为参比电极，铂丝电极为对电极组成；将L-半胱氨酸、胶体金、微囊藻毒素抗体复合物依次分别包被于裸金电极表面制成免疫电极作工作电极即为藻毒素传感器；步骤为：(1)电极清洗先将Φ＝2mm金电极置于Piranha溶液中浸泡10min，再用0.3μm和0.05μm的Al2O3抛光粉将电极表面抛光成镜面，最后分别用金电极等量的硝酸、无水乙醇、超纯水超声清洗5min，氮气吹干，置于4℃冰箱备用；(2)电极的修饰选择L-半胱氨酸-纳米金作为自组装方式，将清洗好的Au电极浸入到pH为5.0的0.5％的L-半胱氨酸L-Cys中室温下浸置5h，取出用超纯水洗净得到L-Cys修饰的Au电极，然后浸入纳米金溶胶溶液中4℃自组装12h；所述纳米金溶胶的配置：用新制双蒸水配制100mL质量浓度为0.01％氯金酸溶液，置于锥形瓶中，用恒温电磁搅拌器加热至沸，在100r/min磁力搅拌下，迅速加入预先在37℃保温的质量浓度1％柠檬酸三钠溶液4.5mL，保持温度和转速不变，继续搅拌加热15min，直至溶液呈现清亮的酒红色，室温冷却，4℃冰箱保存备用；(3)检测抗体的包被藻毒素-LR—KLH免疫得到藻毒素-LR多抗；用超纯水充分清洗nano-Au/L-Cys/Au修饰电极，然后电极表面滴加10μL500μg/L的藻毒素-LR多抗溶液，37℃恒温恒湿温育60min后取出，最后滴加10μL含有1％BSA的PBS溶液，37℃恒温恒湿培育30min后取出，用PBS洗涤，制得的免疫电极作工作电极即为藻毒素传感器，利用电化学工作站CHI760C，进行样品中藻毒素的检测，未立即使用的免疫电极需用氮气吹干后，置于pH7.4的PBS中于4℃保存待用。