[发明专利]一种利用肿瘤细胞生产生物活性产物的方法

摘要

本发明涉及生物工程领域的生物活性蛋白表达体系的建立，该技术可应用于制备重组蛋白，如某些细胞因子、酶及抗原性蛋白(疫苗)，本发明的技术方案是应用功能基因的DNA编码序列及含有核心启动/增强子序列的表达载体组成的基因构件，制备转基因小(大)鼠，从转基因小(大)鼠中获得转基因组织细胞，应用细胞融合的方法将转基因细胞与肿瘤细胞融合产生杂交瘤细胞，杂交瘤细胞接种小鼠腹腔大量生产重组蛋白。应用本发明可大规模、高效率生产重组蛋白。利用杂交瘤细胞及小鼠个体作为生产媒介不仅成本低、产量高，而且较其它动物安全、卫生，易控制质量。因此，本发明在生物产业中有较高的应用价值。

主权项

1、一种利用肿瘤细胞生产生物活性产物的方法，包括以下步骤：(1)构建含有5′核心序列-功能基因-3′核心序列-NEOr基因构件的表达载体，该载体可在杂交瘤细胞中高效表达，所说的5′核心序列如SEQ ID NO.1和SEQ ID NO.2所示，其中SEQ ID NO.2位于SEQ ID NO.1上游，3′核心序列如SEQ ID NO.3所示；(2)分离上述(1)构建的表达载体中的基因构件，制备转基因小鼠或大鼠，从转基因鼠后代成体中分离得到转基因淋巴细胞、成纤维细胞或乳腺上皮细胞；(3)将(2)得到的转基因细胞与小鼠或大鼠肿瘤细胞融合，制备转基因杂交瘤细胞；杂交瘤细胞用催乳素诱导杂交瘤细胞表达，筛选出表达特性优良的细胞株；(4)用筛选出的高表达转基因杂交瘤细胞接种泌乳期BALB/C小鼠或大鼠腹腔，收集小鼠或大鼠腹腔液获得重组蛋白。