[发明专利]一种抗体标记信号放大方法

摘要

本发明公开了一种抗体标记信号放大方法，技术方案是：(1)称取低熔点琼脂糖0.1g，溶于纯化水，水浴溶解后，加入新配0.1M NaIO₄水浴反应45～120分钟后，加入9～15ml无水乙醇，沉淀析出后，离心5～20分钟，去上清后加入纯化水清洗沉淀，重复操作2次，清洗结束后，加入纯化水水浴溶解沉淀，制成溶液A；(2)量取待标记抗体，用NaOH调pH至8.6～9.6，加入100～500ul溶液A，搅拌均匀后，37℃反应30～60分钟，制成溶液B；(3)称取Horseradish Peroxidase(HRP)溶解于蒸馏水中，溶解后，加入1新配的0.1M NaIO₄溶液，避光反应10～30分钟后，加入新配乙二醇避光反应8～15分钟后，制成溶液C；(4)将溶液B与溶液C按体积比1∶1～1∶3混合，避光反应25～45分钟后，加入等体积的醛基封闭液反应15-30分钟，然后将所有溶液装入透析袋中，用1mM pH8.0的磷酸缓冲液避光透析12～24小时，透析结束后将标记抗体从透析袋中取出。可将检测下限提高到10^-18mol/L以下。

主权项

1、一种抗体标记信号放大方法，其特征在于，包括如下步骤：(1)、称取低熔点琼脂糖0.1g，溶于10mminl.gif纯化水，45～50℃水浴溶解后，加入新配0.1MNaIO4 5～10mminl.gif，50～60℃水浴反应45～120分钟后，加入9～15mminl.gif无水乙醇，沉淀析出后，8000～12000rpm离心5～20分钟，去除上清溶液后加入10mminl.gif纯化水清洗沉淀，重复操作2次，清洗结束后，加入50mminl.gif纯化水45～50℃水浴溶解沉淀，制成溶液A；(2)、量取待标记抗体5mg，用NaOH调pH至8.6～9.6，加入100～500uminl.gif溶液A，搅拌均匀后，37℃反应30～60分钟，制成溶液B；(3)、称取5mg辣根过氧化物酶溶解于1mminl.gif蒸馏水中，完全溶解后，加入100～200uminl.gif新配的0.1MNaIO4溶液，30～37℃避光反应10～30分钟后，加入新配10％乙二醇10～20uminl.gif，30～37℃避光反应8～15分钟后，制成溶液C；(4)、将溶液B与溶液C按体积比1∶1～1∶3混合，30～37℃避光反应25～45分钟后，加入等体积的醛基封闭液30～37℃反应15-30分钟，然后将混合后溶液装入透析袋中，用1mM PH8.0的磷酸缓冲液避光透析12～24小时，透析结束后将混合后溶液从透析袋中取出。