[发明专利]一种新疆雪莲组织培养丛生苗及其大规模继代培养的方法

摘要

本发明提供了一种新疆雪莲组织培养丛生苗及其大规模继代培养的方法，该方法包括在MS改良培养基①上诱导形成愈伤组织；在MS改良培养基②上通过愈伤组织筛选和继代诱导出一种可迅速分化丛生苗、稳定继代的愈伤组织XCSY-1，该组织在壮苗培养基上可迅速分化成状态均一的丛生苗。通过对愈伤组织XCSY-1进行继代增殖，可大量培养出生长状态均匀的新疆雪莲丛生苗。该雪莲丛生苗可直接作为产品或原料，又可培育生根试管苗进行人工种植。该方法操作简单，可用于大规模生产，与野生型相比生产周期大大缩短，并且质量稳定，产量高。此外，该方法不占耕地，不破坏雪莲野生资源，保护了生态环境，解决了新疆雪莲资源短缺的问题。

主权项

1、权利要求1所述的一种新疆雪莲组织培养丛生苗及其大规模继代培养的方法，其特征在于，采用野生新疆雪莲的种胚或由种子萌发的无菌苗为外植体，在含激素的MS(配方见附表1)改良培养基①(MS基本培养基+6-BA0.1-0.5mg/L+NAA1-3mg/L+蔗糖3％+琼脂0.6％)上诱导愈伤组织；在含激素的MS(配方见附表1)改良培养基②(MS基本培养基+6-BA2.0-4.0mg/L+NAA0.1-1.0mg/L+蔗糖3％+琼脂0.6％)上通过愈伤组织筛选和继代诱导出一种可稳定继代、芽点突出的愈伤组织XCSY-1；将愈伤组织XCSY-1转接至壮苗培养基上壮苗，形成新疆雪莲丛生苗。具体操作按下列步骤进行：a、植株诱导选取成熟的雪莲种子，用75％的酒精溶液浸泡30秒，用0.1％升汞溶液浸泡振荡灭菌10分钟，用无菌水清洗4-5次；用含有赤霉素2.0-1.0mg/L的水溶液中浸泡24小时；浸泡24小时后，将种子再次使用0.1％升汞溶液浸泡振荡灭菌10分钟，用无菌水清洗4-5次；在无菌条件下剥去种子外壳，撕去种子内膜，将去皮种子接种在配好的植株诱导MS培养基(MS基本培养基+赤霉素2.0-1.0mg/L+蔗糖3％+琼脂0.6％)上，每40毫升培养基播种10粒种子；在25℃下，避光培养5天，待种子发芽后，将培养物转移至光照条件下培养4天，培养成雪莲植株；b、诱导愈伤组织取无菌苗根、茎、叶及子叶、胚芽做外植体，在无菌条件下，用无菌手术剪刀和无菌镊子将无菌苗根、茎、叶及子叶、胚芽切成2-5mm长的小段，接种在MS改良培养基①(MS基本培养基+6-BA0.1-0.5mg/L+NAA1-3mg/L+蔗糖3％+琼脂0.6％)上，22-27℃暗培养，7-10天诱导出愈伤组织。c、诱导愈伤组织XCSY-1将诱导形成的愈伤组织转至MS改良培养基②(MS基本培养基+6-BA2.0-4.0mg/L+NAA0.1-1.0mg/L+蔗糖3％+琼脂0.6％)上，诱导愈伤组织XCSY-1，继代时间15-20天，培养温度为22℃-28℃，光照强度为2200-27001ux，光照时间为8-12小时/天。d、愈伤组织XCSY-1继代培养选取生长旺盛、颜色为嫩绿色或黄绿色、结构紧凑、带有明显尖状突起组织特征的愈伤组织进行周期性的继代培养。培养条件，每100ml MS改良培养基②中转接愈伤组织XCSY-12g，培养周期15-20天，培养温度为22℃-28℃，光照强度为2200-27001ux，光照时间为8-12小时/天；至培养期，选取生长旺盛、颜色为嫩绿色或黄绿色、芽点突出特征的愈伤组织作为种子，种子量为生产量的30％，其他转入壮苗培养基中培养丛生苗。e、丛生苗的培养将筛选出愈伤组织XCSY-1的转至壮苗培养基(MS基本培养基+6-BA1.0-3.0mg/L+NAA0.1-0.5mg/L+蔗糖3％+琼脂0.6％)中，愈伤组织分化，组织上生长出从生苗。培养期结束，丛生苗的叶片数为6-10片、净高5-7cm。培养时间为15-20天，培养温度为22℃-28℃，光照强度为2200-27001ux，光照时间为8-12小时/天。培养结束后，直接收集丛生苗并低温真空干燥，成为新疆雪莲丛生苗组织培养产品。