[发明专利]一种中药菝葜组合物的化学成分分离方法及其临床应用

摘要

本发明涉及一种中药菝葜组合物的化学成分分离方法及其临床应用。包括中药菝葜组合物水提浸膏制备，菝葜组合物水提浸膏的乙酸乙酯提取和对乙酸乙酯提取物的硅胶柱色谱法分离、测定。本分离方法获得二氢山柰酚，二氢山柰酚3-O-α-L-鼠李糖苷，3，3，5，5，7-五羟基二氢黄酮3-O-α-L-鼠李糖苷。其中3，3，5，5，7-五羟基二氢黄酮3-O-α-L-鼠李糖苷首次从菝葜组合物中分离得到。

主权项

1.一种中药菝葜组合物的化学成分分离方法，其特征是主要包括中药菝葜组合物水提浸膏制备，菝葜组合物水提浸膏的乙酸乙酯提取和对乙酸乙酯提取物的硅胶柱色谱法分离、测定：(1)菝葜组合物水提浸膏制备中药材菝葜与土茯苓，按1∶1重量比混合，加煎煮量水煎煮三次，第一次3h，第二、三次各2h，合并煎煮液，滤过，滤液浓缩至相对密度为1.16～1.20/60℃，加入乙醇至含醇量为55～60％，静置，滤过，回收乙醇，浓缩成相对密度为1.27～1.30/60℃的菝葜组合物浸膏，备用；(2)菝葜组合物水提浸膏的乙酸乙酯提取将菝葜组合物的水提浸膏分散在水中呈混悬态，进行乙酸乙酯提取，其重量配比是：菝葜组合物浸膏∶乙酸乙酯＝1∶10；水浴回流提取2次，每次1h，提取液浓缩至干，获得菝葜组合物的水提浸膏的乙酸乙酯提取物，备用；(3)对菝葜组合物的水提浸膏的乙酸乙酯提取物的硅胶柱色谱法分离、测定分作如下步骤①拌样重量比：菝葜组合物浸膏乙酸乙酯提取物重量∶无水硅胶＝1∶3无水硅胶加入到无水乙醇溶解的菝葜组合物浸膏乙酸乙酯提取物溶液中，水浴加热，挥干无水乙醇，使菝葜组合物浸膏乙酸乙酯提取物样品吸附在硅胶中，作为总样，备用；②湿法上柱初始流动相组成为容量比，乙酸乙酯∶环己烷＝1∶3；总样以湿润量的初始流动相拌匀，加入柱径100mm，柱高1000mm的层析柱中；③室温下梯度洗脱洗脱速度设置为250ml/0.5h，常压，开始使用初始流动相，收集洗脱液，分别标号存放；每250ml收集一瓶，水浴回流浓缩，并点薄层板检查；至59瓶后换1号流动相：组成为容量比，乙酸乙酯∶环己烷＝1∶2；至133瓶后换2号流动相：组成为容量比，乙酸乙酯∶环己烷＝1∶1；至216瓶后换3号流动相：组成为容量比，乙酸乙酯∶环己烷＝2∶1；至248瓶后换4号流动相：组成为容量比，3号流动相∶95％乙醇＝10∶1；至275瓶后换5号流动相：组成为容量比，3号流动相∶95％乙醇＝5∶1；④结晶通过薄层层析检测，将成分基本相同的成分合并，其中有41～68号，221～229号和230～238号；静置后，41～46号洗脱液析出淡黄色晶体，抽滤将固体物质取出，命名为化合物I；静置后，221～229号洗脱液析出白色粉末状物质，抽滤将固体物质取出，命名为化合物II；静置后，230～238号析出白色粉末状物质，抽滤将固体物质取出，命名为化合物III；⑤化合物鉴定采用理化常数，紫外，红外，氢核磁共振光谱和碳核磁共振光谱，对分离所得化合物分别测定，确定结构，名称；⑥综合化合物上述信息，本分离方法获得二氢山奈酚，二氢山柰酚3-O-α-L-鼠李糖苷，3，3，5，5，7-五羟基二氢黄酮3-O-α-L-鼠李糖苷。其中3，3，5，5，7-五羟基二氢黄酮3-O-α-L-鼠李糖苷首次从菝葜中分离得到。