[发明专利]建立油菜细胞质类型特异PCR标记以及快速鉴定油菜细胞质类型的方法无效
| 申请号： | 200910022297.0 | 申请日： | 2009-04-30 |
| 公开（公告）号： | CN101608198A | 公开（公告）日： | 2009-12-23 |
| 发明（设计）人： | 胡胜武;赵惠贤;李占杰 | 申请（专利权）人： | 西北农林科技大学 |
| 主分类号： | C12P19/34 | 分类号： | C12P19/34;C12Q1/68 |
| 代理公司： | 西安恒泰知识产权代理事务所 | 代理人： | 李郑建 |
| 地址： | 712100陕西*** | 国省代码： | 陕西;61 |
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| 摘要： | 本发明公开了一种建立油菜细胞质类型目标基因特异PCR标记的方法，以及利用建立的该油菜细胞质类型目标基因特异PCR标记，用于快速鉴定油菜细胞质类型的用途。本发明主要通过以已知细胞质类型油菜和待鉴定的油菜基因组DNA为模板，用3对特异PCR引物，对已知Nap、Pol、Cam、Ogu和改良Ogu细胞质类型油菜基因组DNA进行一步多重PCR扩增，以及扩增产物的分析，建立了Nap、Pol、Cam、Ogu和改良Ogu细胞质类型油菜一步多重PCR特异标记，根据这些特异分子标记，可以快速鉴定出待测甘蓝型油菜的细胞质类型。用本发明方法鉴定油菜细胞质类型，具有快速、简单、结果准确、成本低廉、可重复性好的特点。 | ||
| 搜索关键词： | 建立 油菜 细胞质 类型 特异 pcr 标记 以及 快速 鉴定 方法 | ||
【主权项】：
1、一种建立油菜细胞质类型目标基因特异PCR标记的方法，其特征在于，该方法包括下列步骤：1)以已知细胞质类型的甘蓝型油菜：包括Nap、Pol、Ogu和Cam类型的甘蓝型油菜的gDNA为模板，用以下3对扩增引物对目标基因Orf138、orf222/nad5c、orf224进行一步多重PCR扩增，其中：第一对引物的序列为：GAAACGGGAAGTGACAATGCATTATTTTCTCGGTCCAT；第二对引物的序列为：AGCTGTCTGGAGGGAATCGCGGTCTCACGCACTAATC；第三对引物的序列为：AGCTGTCTGGAGGGAATCACGACATCAAGGAGGAAC；第一对引物扩增目标基因是Orf138；第二对引物扩增目标基因是orf222/nad5c；第三对引物的扩增目标基因是orf224；2)一步多重PCR扩增采用20ul的PCR反应体系，进行35个PCR循环反应，得到片段大小分别为465bp、500bp、747bp、800bp、1102bp的特异PCR标记，其中，465bp和500bp的标记标示ogu细胞质类型，1102bp和800bp的标记标示nap细胞质类型，747bp和500bp的标记标示pol细胞质类型，800bp和500bp的标记标示Cam细胞质类型，1102bp和465bp的标记标示改良ogu细胞质类型。
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