[发明专利]带背景验证的信号组合编码DNA连接测序方法

摘要

本发明带背景验证的信号组合编码DNA连接测序方法涉及一种具有背景校验的信号组合编码的DNA连接测序方法，属于生物技术领域。本发明的特征在于在信号组合编码的连接测序反应中增加了背景校验，成功地对全空信号与未发生连接反应两种情况进行了分辨，提高测序的准确率，增加了信号编码测序的可靠性。本发明在组合信号编码标记物外增加一种背景标记物，利用背景标记物对连接反应是否正常发生进行验证，验证成功后通过不同编码标记物在被检测时组合信号状态进行编码，并与所测碱基的种类一一对应，进行信号编码的连接DNA测序反应，在不降低测序通量的基础上提高测序反应的准确度。

主权项

1.一种带背景验证的信号组合编码的DNA连接测序方法，其特征在于针对某一种特定的DNA测序探针，利用一组编码标记物状态的组合结合背景标记物进行标记，对于一批DNA测序探针，采用一组编码标记物状态的不同组合方案结合背景标记物进行标记，制备一套带背景验证的信号组合编码的DNA测序探针，从而实现在检测时对不同DNA测序探针的区分和鉴别：A一套带背景验证的信号组合编码的DNA测序探针的制备：首先制备未标记的DNA测序探针，每一种未标记的DNA测序探针由一个或多个测序碱基、一个或多个简并碱基N或非严格配对碱基组成；测序碱基用于通过碱基互补配对法则测定待测DNA中相应位置的碱基信息，简并碱基N为A、T、C、G四种碱基中的任意一个；完成未标记的DNA测序探针的制备后，针对每一种未标记的DNA测序探针，采用多种编码标记物状态的一种组合进行标记，同时标记背景标记物，每种编码标记物在该DNA测序探针上标记与否及标记的量由该编码标记物在状态的组合中所对应的状态决定；采用不同的状态组合方案结合背景标记物对不同的未标记DNA测序探针进行标记，完成一套带背景验证的信号组合编码的DNA测序探针的制备；B利用上述一套带背景验证的信号组合编码的DNA测序探针的测序流程如下：a.选取一条测序引物与待测的DNA模板依据碱基互补配对原理进行杂交；b.向反应体系中加入上述的一套带背景验证的信号组合编码的DNA测序探针和DNA连接酶及其反应体系，进行DNA连接反应；c.完成DNA连接反应后，检测全部参与状态组合的标记物及背景标记物的信号，首先判读背景标记物是否符合校验，如符合，判读编码标记物信号所处的状态，根据全部编码标记物状态的组合情况，确定发生连接反应的DNA测序探针的种类，从而确定该测序探针上测序碱基的类型和排布，并最终确定被测DNA模板上对应位置的碱基或碱基序列信息；d.完成对标记物信号的检测后，移除DNA测序探针上的标记物；e.重复上述步骤b-d直至DNA测序探针达到或超出待测DNA模板待测区域末端；f.该测序引物与待测DNA模板变性分离，选取第二条测序引物；g.重复上述步骤a-f，直至全部未知DNA模板的待测区域的全部序列信息得以确定。