[发明专利]一种侧面组装的金纳米棒标记抗体定量检测氨苄青霉素的方法

摘要

一种侧面组装的金纳米棒标记抗体定量检测氨苄青霉素的方法，属于免疫检测技术领域。本发明将氨苄青霉素抗体及包被原修饰到金纳米棒的侧面上去，再加氨苄青霉素标准品或待测上清液，氨苄青霉素标准品与包被原竞争修饰在金纳米棒侧面上的抗体，随着加入的氨苄青霉素标准品的量的不同，所形成的抗体与包被原的金纳米棒侧面组装的免疫聚合物的粒径大小不同，由此用激光粒度仪进行检测而完成对含氨苄青霉素待测样品的检测。本法不需复杂的样品前处理；操作简便，只需加待测样品孵育后直接用仪器测定，一步就可完成；用于标记金纳米棒约为13×40nm，水溶性高，分散性稳定性好。

主权项

一种侧面组装的金纳米棒标记抗体定量检测氨苄青霉素的方法，其特征是首先分别将氨苄青霉素抗体及包被原修饰到金纳米棒上去，再加氨苄青霉素标准品或待测上清液，氨苄青霉素标准品与包被原竞争修饰在金纳米棒上的抗体，随着加入的氨苄青霉素标准品的量的不同，所形成的抗体与包被原的金纳米棒的侧面组装的免疫聚合物的粒径大小不同，由此用激光粒度仪进行检测而完成对含氨苄青霉素待测样品的检测；步骤为：(1)氨苄青霉素抗体及包被原与金纳米棒的偶联：a.抗体与金纳米棒偶联：0.5mL、100μg/mL的氨苄青霉素抗体逐滴加入用0.1mol/L的碳酸钾预调至pH 8.5-8.8、0.5mL、2n mol/L金纳米棒溶液中，室温震荡混匀，37℃反应1h，反应结束6000rpm离心20min，去除未结合的抗体，重悬在pH 7.4、含0.5％聚乙二醇PEG20000的0.01mol/L的PBS中，制得氨苄青霉素抗体修饰的金纳米棒探针；b.包被原与金纳米棒偶联：0.5mL、100μg/mL的氨苄青霉素包被原逐滴加入用0.1mol/L的盐酸预调至pH 5、0.5mL、2n mol/L的金纳米棒溶液中，室温震荡混匀，37℃反应1h，反应结束6000rpm离心20min，去除未结合的包被原，重悬在pH 7.4、含0.5％PEG20000的0.01mol/L的PBS中，制得氨苄青霉素包被原修饰的金纳米棒探针；(2)金纳米棒侧面组装10μL修饰氨苄青霉素包被原的金纳米棒溶液与10μL不同浓度的氨苄青霉素标准品加入到1.5mL的离心管中，充分混匀，再加入10μL修饰氨苄青霉素抗体的金纳米棒溶液，漩涡混匀，37℃孵育0.5h后，取20μL反应液稀释到体积为1mL，加入到塑料检测小池中，测反应完的金纳米棒侧面组装的免疫聚合物的粒径；所用的溶液皆为pH 7.4、0.01mol/L的PBS缓冲液；氨苄青霉素标准品浓度C分别为0、0.1、0.5、1.0、5.0、10.0、20.0、100ng/mL；(3)激光粒度仪检测，绘制金纳米棒免疫聚合物的粒径Size～氨苄青霉素浓度C标准曲线Size～C：用英国马尔文激光粒度仪检测用不同浓度C的氨苄青霉素标准品侧面组装的金纳米棒免疫聚合物的粒径Size，检测温度为20℃，检测角度为173°，激发光源波长633nm，激光功率5mW；绘制标准曲线Size～C；(4)激光粒度仪定量检测：10μL修饰氨苄青霉素包被原的金纳米棒溶液与10μL含氨苄青霉素的样品加入到1.5mL的离心管中，充分混匀，再加入10μL修饰氨苄青霉素抗体的金纳米棒溶液，漩涡混匀，37℃孵育0.5h后，取20μL反应液稀释到体积为1mL，加入到塑料检测小池中，测反应完的金纳米棒侧面组装的免疫聚合物的粒径Size，以聚合物的粒径Size与标准曲线Size～C对照，求出样品中氨苄青霉素的浓度C。