[发明专利]将单分子DNA连接到单个磁珠上的方法有效
| 申请号： | 200910056335.4 | 申请日： | 2009-08-13 |
| 公开（公告）号： | CN101619353A | 公开（公告）日： | 2010-01-06 |
| 发明（设计）人： | 王志民;李明 | 申请（专利权）人： | 上海交通大学 |
| 主分类号： | C12Q1/68 | 分类号： | C12Q1/68 |
| 代理公司： | 上海交达专利事务所 | 代理人： | 王锡麟;王桂忠 |
| 地址： | 200240*** | 国省代码： | 上海;31 |
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| 摘要： | 一种生物技术领域的将单分子DNA连接到单个磁珠上的方法：将DNA荧光标记，之后进行如下操作：在DNA的3’端标记生物素，5’端标记地高辛；或者在DNA的3’端标记地高辛，5’端标记生物素；将DNA置于玻璃上进行免疫反应，流水洗涤；再进行第二次免疫反应；将DNA内切酶加到磁珠周围，待DNA分子被降解后，用微枪尖逐一收集携带片段DNA的磁珠，并将其置于磁铁上；利用内切酶切割目的DNA，在连接酶作用下，将目的DNA片段与磁珠上的DNA片段连接。本发明的方法可以获得目的片段序列信息；可实现DNA的单分子测序；将纳米孔制作成阵列，与诱饵阵列配合，可提高测序通量。 | ||
| 搜索关键词： | 分子 dna 接到 单个 磁珠上 方法 | ||
【主权项】：
1、一种将单分子DNA连接到单个磁珠上的方法，其特征在于，包括如下步骤：步骤一，将DNA荧光标记，之后进行如下操作：在DNA的3’端标记生物素，5’端标记地高辛；或者在DNA的3’端标记地高辛，5’端标记生物素；步骤二，将DNA置于表面用抗地高辛被覆的玻璃上进行免疫反应，流水洗涤；或将DNA置于表面用抗链霉生物素被覆的玻璃上进行免疫反应，流水洗涤；步骤三，如果步骤二是地高辛-抗地高辛免疫反应，则将抗链霉生物素被覆的磁珠添加到玻璃表面，进行第二次免疫反应；如果步骤二是生物素-抗链霉生物素免疫反应，则将抗地高辛被覆的磁珠添加到玻璃表面，进行第二次免疫反应；步骤四，将DNA内切酶加到磁珠周围，待DNA分子被降解后，用微枪尖逐一收集携带短片段DNA的磁珠，并将其置于磁铁上；步骤五，利用DNA内切酶切割目的DNA，在连接酶作用下，将目的DNA片段与磁珠上的DNA片段连接。
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