[发明专利]乙型肝炎病毒分离株复制型质粒的构建方法有效
| 申请号： | 200910056451.6 | 申请日： | 2009-08-14 |
| 公开（公告）号： | CN101993893A | 公开（公告）日： | 2011-03-30 |
| 发明（设计）人： | 张欣欣;于德敏;张东华;陈立;邓俊;姜节洪 | 申请（专利权）人： | 上海交通大学医学院附属瑞金医院 |
| 主分类号： | C12N15/85 | 分类号： | C12N15/85;C12R1/93 |
| 代理公司： | 上海翼胜专利商标事务所(普通合伙) 31218 | 代理人： | 翟羽 |
| 地址： | 200237 *** | 国省代码： | 上海;31 |
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| 摘要： | 本发明公开了一种乙型肝炎病毒分离株复制型质粒的构建方法，包括(1)HBV全长基因组的抽提、PCR扩增和克隆构建；(2)重组过渡载体的构建；(3)重组过渡载体的酶切与去磷酸化；(4)复制型质粒的构建，所述重组过渡载体由三个连接片段同时定向连接，两个插入的HBV片段之间形成两个反向的BspQI酶切位点，使用SOC培养基进行HBV全长基因组克隆和复制型质粒的菌落培养扩增。本发明应用了新型的全长基因组克隆载体、改进了酶切方案以及采用了新型菌落培养基。具有方法简捷，高效稳定的优点，可对中国的HBV临床分离株全基因组进行全面综合的表型研究，具有重要的应用价值。 | ||
| 搜索关键词： | 乙型肝炎 病毒 分离 复制 质粒 构建 方法 | ||
【主权项】：
一种乙型肝炎病毒分离株复制型质粒的构建方法，包括(1)HBV全长基因组的抽提、PCR扩增和克隆构建；(2)重组过渡载体的构建；(3)重组过渡载体的酶切与去磷酸化；(4)复制型质粒的构建，其特征在于：所述重组过渡载体由三个连接片段同时定向连接，两个插入的HBV片段之间形成两个反向的BspQI酶切位点，使用SOC培养基进行HBV全长基因组克隆和复制型质粒的菌落培养扩增。
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