[发明专利]奶牛和杂交牛脊椎畸形综合征PCR-RFLP检测方法有效
| 申请号： | 200910060531.9 | 申请日： | 2009-01-19 |
| 公开（公告）号： | CN101475990A | 公开（公告）日： | 2009-07-08 |
| 发明（设计）人： | 张淑君;杨利国;李翔;胡修忠;刘文举;宋利军;陈世林;童勤 | 申请（专利权）人： | 华中农业大学 |
| 主分类号： | C12Q1/68 | 分类号： | C12Q1/68 |
| 代理公司： | 武汉宇晨专利事务所 | 代理人： | 王敏锋 |
| 地址： | 430070湖*** | 国省代码： | 湖北;42 |
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| 摘要： | 本发明属于动物疾病检测技术领域，具体涉及一种牛隐性遗传疾病脊椎畸形综合征(CVM)检测领域。其步骤如下：从被检牛样本中提取牛基因组DNA，根据牛SLC35A3基因序列，设计引入酶切位点的PCR扩增引物对，进行PCR反应，扩增产物用2.5％琼脂糖凝胶电泳进行检测，染色，在凝胶成像系统中观察条带，回收PCR产物进行酶切，反应完成后，在10％聚丙烯酰胺凝胶中电泳检测，根据扩增产物的条带分布情况判断所检样本的基因型。 | ||
| 搜索关键词： | 奶牛 杂交 脊椎 畸形 综合征 pcr rflp 检测 方法 | ||
【主权项】：
1、一种牛隐性遗传疾病脊椎畸形综合征的鉴定方法，其步骤如下：(1)从被检牛样本中提取牛基因组DNA；(2)根据牛SLC35A3基因序列，设计引入酶切位点的PCR扩增引物对，所述引物对的核苷酸序列如下：正向：5’GCTCTCCTCTGTAATCCCCA3’，反向：5’CCACTGGAAAAACATGCTGTGAGTA3’；(3)PCR反应扩增程序为：94℃变性3min，35次循环(94℃ 1min，65℃ 1min，72℃1min)，72℃延伸10min，得到PCR扩增产物；(4)用2. 5％琼脂糖凝胶电泳对步骤(3)的扩增产物进行检测，所述电泳条件为电压100V，时间为20min，染色，在凝胶成像系统中观察条带；(5)取16μL PCR扩增产物，加入5URsaI限制内切酶和2μL 10×酶切缓冲液，加水至20μL，37℃，反应5h；(6)反应完成后，在10％聚丙烯酰胺凝胶电泳，电泳条件为稳压100V，时间为4h，银染，根据扩增产物的大小判定结果。
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