[发明专利]类鼻疽检测试剂盒及检测方法

摘要

本发明公开了一种类鼻疽检测试剂盒及检测方法，该试剂盒包括预包被反应板、酶标抗体、洗液20×、底物溶液A，B和终止液。使用该试剂盒，首先将样品放入5ml含有粘杆菌素和庆大霉素的LB液体培养基过夜培养，然后取培养液上清100μl用于ELISA检测。检测包括：取LB试管，分别加入庆大霉素和粘杆菌素；取临床样品加入试管中；取培养液上清用于检测，加样，每孔加入待测菌液，设阴性对照孔；洗液冲洗五次；酶标：加入酶标抗体，冲洗；显色：每孔加底物溶液各一滴显色A与B；终止：每孔加终止液。本发明检测速度快，操作方便安全，省时效率高，从而达到了早期诊断和治疗类鼻疽的感染；也可以应用于类鼻疽假单胞菌疫原地进行大规模的流行病学调查。

主权项

1，一种类鼻疽假单胞菌的检测试剂盒，该试剂盒包括：酶联板：一块，酶联板的包被：将单克隆抗体3#用碳酸盐缓冲液稀释到5μg/ml，100μl/孔包被反应板，4℃冰箱中孵育过夜，洗涤液洗涤两次，加入125μl/孔的封闭液的牛血清白蛋白，室温放置8个小时，丢掉封闭液，37℃烤箱8个小时后封板，得到预包被反应板；酶标抗体：1×20ml/瓶，酶标抗体的制备，称取5mg HRP溶解于1ml蒸馏水中，于上液中加入0.2ml新配的0.1M NaIO4溶液，室温下避光搅拌20分钟，将上述溶液装入透析袋中，对1mM PH 4.4的醋酸钠缓冲液透析，4℃过夜，加20μl0.2M PH9.5碳酸盐缓冲液，使以上醛化程RP的PH升高到9.0～9.5，然后加入10mg IgG在1ml 0.01M碳酸盐缓冲液中，室温避光轻轻搅拌2小时，加0.1ml新配的4mg/ml NaBH4液，混匀，再置4℃ 2小时，将上述液装入透析袋中，PBS透析，4℃过夜；检测液A：1×10ml/瓶，检测液B：1×10ml/瓶；浓洗涤液：1×30ml/瓶，使用时每瓶用蒸馏水稀释20倍，浓洗涤液的配制：NaCl 137mmol/L，KCl 2.7mmol/L，Na2HPO4 4.3mmol/L，KH2PO4 1.4mmol/L，向烧杯中加入约40ml的去离子水，搅拌溶解，滴加浓盐酸将pH值调节至8.0，然后加入去离子水将溶液定容至50ml；终止液：1×10ml/瓶，终止液：量取20ml 98％ H2SO4，加至80ml双蒸水中。