[发明专利]一种检测呼肠孤病毒的荧光定量PCR试剂盒及应用

摘要

本发明公开了一种检测呼肠孤病毒的荧光定量PCR试剂盒及应用，该试剂盒含有：a)RNA抽提液、b)逆转录酶反应液、c)逆转录酶、d)RNA酶抑制剂、e)引物和TaqMan探针、f)标准阳性DNA模板、g)PCR荧光定量反应液，其特征是：引物序列分别为正义引物：5′-TGCGCCTATCCTTGAGTTGA-3′，反义引物：5′-TTGCCAGGAAATACGGGTCT-3′，扩增子大小为138bp，荧光探针序列为：5′-FAM-TCAAAATGGTGGACTTCAGTTTCGATTT-TAMRA-3′，探针的5’端标记荧光发射基团FAM，3’端标记荧光淬灭基团TAMRA，标准阳性DNA模板由已插入呼肠孤病毒S1蛋白区361bp片段的pGEM-T载体转化大肠杆菌DH5α，增殖后提取质粒，并于紫外分光光度计测A₂₆₀定量并10倍梯度稀释。高效方便地对血清制品中的呼肠孤病毒的污染进行实时监控，可广泛用于该病毒感染的流行病学调查，还能为相关基础研究提供技术支持，应用前景十分广泛。

主权项

1、一种检测呼肠孤病毒的荧光定量PCR试剂盒，该试剂盒含有：a)RNA抽提液、b)逆转录酶反应液、c)逆转录酶、d)RNA酶抑制剂、e)引物和TaqMan探针、f)标准阳性DNA模板、g)荧光定量PCR反应液，其特征在于：引物序列分别为正义引物：5′-TGCGCCTATCCTTGAGTTGA-3′，反义引物：5′-TTGCCAGGAAATACGGGTCT-3′，扩增子大小为138bp，荧光探针序列为：5′-FAM-TCAAAATGGTGGACTTCAGTTTCGATTT-TAMRA-3′，探针的5’端标记荧光发射基团FAM，3’端标记荧光淬灭基团TAMRA，标准阳性DNA模板由已插入呼肠孤病毒S1蛋白区361bp片段的pGEM-T载体转化大肠杆菌DH5α，增殖后提取质粒，并于紫外分光光度计测A260定量并10倍梯度稀释。