[发明专利]利用基因工程菌株耦合发酵合成GDP-甘露糖体系的构建方法无效
| 申请号： | 200910070580.0 | 申请日： | 2009-09-25 |
| 公开（公告）号： | CN101671692A | 公开（公告）日： | 2010-03-17 |
| 发明（设计）人： | 李玉;孔董俊;王春霞;路福平 | 申请（专利权）人： | 天津科技大学 |
| 主分类号： | C12N15/70 | 分类号： | C12N15/70;C12P19/32;C12R1/19 |
| 代理公司： | 天津盛理知识产权代理有限公司 | 代理人： | 王来佳 |
| 地址： | 300457天津市*** | 国省代码： | 天津;12 |
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| 摘要： | 本发明涉及一种利用基因工程菌株耦合发酵合成GDP-甘露糖体系的构建方法，是利用基因工程技术构建代谢工程菌株实现代谢途径中各种酶的高效表达，进而达到GDP-甘露糖的大量合成，打破大量获得岩藻糖基化寡糖较难的瓶颈，为进一步批量生产人乳寡糖提供有效的途径，为天然寡糖药物的生产提供了原料，符合当前生物药物领域发展趋势，不仅具有较强的基础理论研究价值，而且具有巨大的经济效益和社会效益，市场开发前景广阔。 | ||
| 搜索关键词： | 利用 基因工程 菌株 耦合 发酵 合成 gdp 甘露 体系 构建 方法 | ||
【主权项】：
1、一种利用基因工程菌株耦合发酵合成GDP-甘露糖体系的构建方法，其特征在于：构建方法包括以下步骤：(1)基因扩增：根据大肠杆菌K-12基因组中己糖激酶基因glk、磷酸甘露糖变位酶基因manB和甘露糖-1-磷酸鸟苷酰转移酶基因manC的序列设计引物，扩增出大肠杆菌中的三个酶基因序列；(2)重组质粒的构建：用酶切连接的方法分别将上述三种目的基因与载体pET-22b相连，得到携带酶基因的重组表达载体，并进行双酶切验证；(3)基因工程菌株的构建：将上述验证正确的重组表达载体转化入宿主菌株BL21(DE3)中，得到含有重组质粒的三种基因工程菌株；(4)混合发酵合成GDP-甘露糖：三个基因工程菌株的混合发酵，通过改变细胞通透性使工程菌株的产物作用于甘露糖合成GDP-甘露糖。
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