[发明专利]微管内等电聚焦和剪断吹出培养测定微生物等电点的方法

摘要

本发明为微管内等电聚焦和剪断吹出培养测定微生物等电点的方法，属于生物分析领域。本发明首先将载体两性电解质溶液在毛细管内采用恒定电压进行等电聚焦，使毛细管内形成了连续pH梯度的两性电解质；然后根据所加两性电解质形成的pH梯度与毛细管总长的线性关系，对毛细管进行等分剪断；最后对每段微管样品进行菌落培养，根据有菌落生长的微管在总管长中所处的位置来确定微生物的pH范围。本发明测定方法简单，快速，直观，该方法不仅可用于各种微生物等电点测定，并可用于微生物菌种的筛选。

主权项

1、微管内等电聚焦和剪断吹出培养测定微生物等电点的方法，其特征在于具体测量步骤如下：1)用0.1M盐酸对微管壁进行冲洗，去除管壁上附着的杂质；然后将体积分数为4％的载体两性电解质和体积分数为0.1％为甲基纤维素加入无菌水，向其中加入微生物样品，浓度为105cfu/ml，构成样品溶液，注满微管；一端插入阴极缓冲液，另一端插入阳极缓冲液，然后加10～25KV的恒定电压进行聚焦，待电流平稳后，聚焦完成，停止加电压，使微管内部形成连续pH梯度的两性电解质；2)将微管取出，根据所加两性电解质形成的pH梯度与微管总长的线性关系，对微管进行等分剪断，使每段微管指示了一定的pH范围；3)用无菌水将微管内溶液吹出到固体培养基上，进行细菌培养；对细菌培养结果进行菌落观察，根据有菌落生长的微管在总长中所处的位置来确定微生物的pH范围，即等电点范围。