[发明专利]蔗糖密度梯度紫外光定量法检测口蹄疫抗原146S含量的方法

摘要

本发明提供了蔗糖密度梯度紫外光定量法检测口蹄疫抗原146S含量的方法，先对待测病毒浓缩液进行蔗糖密度梯度超速离心，再用紫外光分光光度计对各个级份连续测定OD_259nm值；然后计算被检测样品OD值峰面积，根据公式：(FR×PA×FSD×1000)/(S×PL×E×W)计算出病毒液中146S的含量，其中：FR是蔗糖通过样品池的流速；PA是峰面积；S是速度；FSD是吸光度单位；PL是流动样品池的光程长度；W是加在梯度上的样品原始重量或体积；E为校正系数，为任选的正数。该方法具有较好的重复性和适用性，可用于各种口蹄疫病毒146S相对含量的准确定量测定。

主权项

1、蔗糖密度梯度紫外光定量法检测口蹄疫抗原146S含量的方法，其特征在于，包括以下步骤：(1)预处理病毒液除去杂蛋白；(2)超速离心病毒液，用PBS液重悬至原体积的1/8～1/12，得到病毒浓缩液，置于2～8℃冰箱中备用；(3)制备15％～45％均匀线性蔗糖梯度；(4)利用制备的15％～45％均匀线性蔗糖梯度对所述病毒浓缩液进行蔗糖密度梯度超速离心；(5)弃掉梯度顶部1～2ml液体，将连接在连续流紫外分光光度计流动样品池上进样端的长针头缓慢插入待检各管样品的管底，按照连续流紫外分光光度计的操作程序，对每管样品泵入流动样品池的各个级份进行连续测定OD259nm值；(6)计算被检测样品OD值峰面积，根据下列公式：$\frac{\mathrm{FR}\×\mathrm{PA}\×\mathrm{FSD}\×1000}{S\×\mathrm{PL}\×E\×W}$计算出病毒液中146S的含量，其中：FR是蔗糖通过样品池的流速；PA是峰面积；S是速度；FSD是吸光度单位；PL是流动样品池的光程长度；W是加在梯度上的样品原始重量或体积；E为校正系数，为任选的正数。