[发明专利]悬浮细胞蚀斑滴定口蹄疫病毒的方法

摘要

本发明提供了悬浮细胞蚀斑滴定口蹄疫病毒的方法，包括以下步骤：(1)将琼脂糖生理盐水溶液与无血清培养基混匀得到琼脂溶液；(2)将所述琼脂溶液加至细胞培养板中，得底层琼脂培养板；(3)制得细胞悬液；(4)稀释待测定的口蹄疫毒液，得到梯度浓度口蹄疫毒液；(5)得到含有各梯度浓度口蹄疫病毒的上层琼脂溶液和对照用的上层琼脂溶液；(6)分别将所述含有各梯度浓度口蹄疫病毒的上层琼脂溶液和对照用的上层琼脂溶液加入到底层琼脂培养板的各培养孔中，凝固后用封口膜封口，倒置于CO₂培养箱中培养，得到蚀斑计数板；(7)中性红染色，对着灯光观察蚀斑计数板的各培养孔的蚀斑数；(8)计算毒价。该方法的检测条件均一，可控性强，批间误差小。

主权项

1、悬浮细胞蚀斑滴定口蹄疫病毒的方法，包括以下步骤：(1)将琼脂糖生理盐水溶液与无血清培养基按照0.9～1.1∶1的体积比混匀，得到琼脂溶液，其中，琼脂糖生理盐水溶液含有1.9～2.1重量％的琼脂糖和0.85～0.9重量％的盐；(2)将所述琼脂溶液加至细胞培养板中，晃动细胞培养板，使所述琼脂溶液铺满细胞培养板底层，得底层琼脂培养板，置于平坦的位置，冷却、凝固；(3)BHK-21悬浮培养细胞，800～1000rpm离心5～8分钟，得到浓缩细胞，用无血清培养基稀释浓缩细胞得到细胞悬液，细胞密度为0.6×107～1.0×107个/毫升；(4)106～107倍稀释待测定的口蹄疫毒液，得到梯度浓度口蹄疫毒液；(5)分别将9～11体积份的各梯度浓度口蹄疫毒液和9～11体积份的对照液都与39～41体积份的所述细胞悬液和48～52体积份的琼脂糖生理盐水混合，得到含有各梯度浓度口蹄疫病毒的上层琼脂溶液和对照用的上层琼脂溶液，其中，琼脂糖生理盐水溶液含有1.9～2.1重量％的琼脂糖和0.85～0.9重量％的盐；(6)分别将所述含有各梯度浓度口蹄疫病毒的上层琼脂溶液和对照用的上层琼脂溶液加入到步骤(2)得到的底层琼脂培养板的各培养孔中，凝固后用封口膜封口，倒置于CO2培养箱中培养24～48小时，得到蚀斑计数板；(7)向蚀斑计数板内加入0.02～0.03重量％的中性红染色液，作用10～30分钟后，移去中性红染色液，对着灯光观察蚀斑计数板的各培养孔的蚀斑数；(8)含有对照用的上层琼脂溶液的培养孔无蚀斑出现的蚀斑计数板为有效板，根据有效板的各培养孔的蚀斑数、接种的待测定的口蹄疫病毒液的用量及稀释倍数计算出待测定的口蹄疫病毒液的毒价。