[发明专利]一种快速鉴定烟草野火病菌的试剂盒及其鉴定方法

摘要

本发明公开一种快速鉴定烟草野火病菌的试剂盒及其鉴定方法，属植物病原细菌的免疫测定法技术领域。该试剂盒由酶标反应板和如下相关试剂构成，(1)抗血清：PsY5A，(2)0.05M pH9.6包被缓冲液；(3)0.01M pH7.4PBS；(4)1×PBST洗涤液；(5)pH5.4的底物缓冲液；(6)TMB底物反应液；(7)SPA及HRP-SPA(8)阳性对照物为烟草野火病菌株系的菌悬液，菌体浓度为5×108cells/ml。本发明还提供了用该试剂盒进行鉴定的方法。本发明以制备的PsY5A抗血清为基础，应用SPA-ELISA技术，使检测真正做到了简便、快速、灵敏、准确。

主权项

一种快速鉴定烟草野火病菌的试剂盒，该试剂盒由酶标反应板和相关试剂构成，所述的相关试剂有以下部分：(1)抗血清：PsY5A，所述的PsY5A抗血清是通过检测菌株的致病性筛选致病力强的烟草野火病Pseudomonas syringae pv.tabaci Y5菌株为抗原，通过免疫注射健康新西兰大耳兔，按照颈动脉放血方法获得；(2)0.05M pH9.6包被缓冲液，所述的包被缓冲液用Na2CO31.59g，NaHCO32.93g，加蒸馏水至1000ml制得；(3)0.01M pH7.4磷酸缓冲液；(4)1×PBST洗涤液，所述的1×PBST洗涤液为吐温-200.5ml加0.01M pH7.4磷酸缓冲液至1000ml；(5)pH5.4的底物缓冲液，其中A液为0.1M柠檬酸2.22ml；B液为0.1MNa2HPO42.78ml加蒸馏水10ml；(6)四甲基联苯胺底物反应液，所述的四甲基联苯胺底物反应液由四甲基亚砜配制成10mg/ml四甲基联苯胺100μl，加入0.65％H2O225μl，再加入上述底物缓冲液至10μl；(7)金黄色葡萄球菌A蛋白纯品及辣根过氧化物酶标记金黄色葡萄球菌A蛋白，所述的金黄色葡萄球菌A蛋白纯品的工作浓度为2.5μg/ml，以包被缓冲液先配成1mg/ml母液，4℃贮备；所述的辣根过氧化物酶标记金黄色葡萄球菌A蛋白的工作浓度为1∶40；(8)阳性对照物为烟草野火病菌(Pseudomonas syringae pv.tabaci)Y5株系的菌悬液，菌体浓度为5×108cells/ml。