[发明专利]表面增强拉曼光谱检测动物活性单细胞样品处理方法

摘要

本发明涉及一种表面增强拉曼光谱检测动物活性单细胞样品处理方法。过程是：取固体硝酸银溶于去离子水中，加热至100℃，滴入柠檬酸三钠的水溶液，搅拌后沸腾，离心取下层浓缩的银溶胶；将待测的检测样品活性细胞用细胞培养液制成单细胞悬液；取制备好的银溶胶进行第二次离心，弃上清液后加入细胞培养液制成银溶胶悬浮液，将银溶胶悬浮液与单细胞悬浮液按1∶4的体积比例混合混匀，转入电击杯样品池中，进行冰浴后进行电穿孔，而后冲洗出样品池，经冰浴后转移到培养箱中培养，即可利用共焦拉曼光谱仪检测样品。本发明具有简单快速、可靠性高、通用性好的特点，可获得活性细胞内部清晰稳定的表面增强拉曼光谱。

主权项

1、一种表面增强拉曼光谱检测动物活性单细胞样品处理方法，其特征是：(1)银溶胶预制备取9～12mg的固体硝酸银溶于50ml去离子水中，加热至100℃，然后将1ml柠檬酸三钠的水溶液逐滴加入，快速搅拌后继续沸腾2小时～6小时，得到银溶胶的粗制品，离心取下层浓缩的银溶胶备用；(2)单细胞悬液的制备将待测的检测样品活性细胞首先用市售的RPMI1640细胞培养液制成单细胞悬液；(3)银溶胶-单细胞悬液混合液的制备取(1)中制备好的银溶胶1～4ml进行第二次离心10分钟，弃上清液后加入50～200μl市售的RPMI1640细胞培养液制成银溶胶悬浮液，将银溶胶悬浮液与(2)中制备的单细胞悬浮液按1∶4的体积比例混合混匀，制成银溶胶-单细胞悬浮液并在室温下保存；(4)表面增强拉曼光谱检测样品预处理过程将混合好的银溶胶-单细胞悬浮液转入电击杯样品池中，进行冰浴，5～10分钟后进行电穿孔，而后立即冲洗出样品池，置冰浴中5～10min后，转移到培养箱中37℃培养10分钟，即可利用共焦拉曼光谱仪检测样品。