[发明专利]用于检测人类K-ras基因突变的引物、探针及其使用方法

摘要

用于检测人类K-ras基因突变的引物、探针及其使用方法，涉及基因突变的检测。本发明将荧光定量PCR技术与荧光双环探针技术方法相结合，发展了一种可以快速检测基因突变的多重实时荧光PCR方法并设计了相关引物。将该方法用于检测K-ras基因第12位和第13位密码子发生的突变，分别采用针对其不同突变方式设计的突变型引物对待测样品进行检测，只有突变型样品能被顺利扩增出双链DNA产物，该产物才能与双链DNA探针结合，发出荧光信号从而被检测到。本发明可检测到样品中含量为1/1000的突变型基因。具有快速、简便、安全、高灵敏、高通量和低成本等优点，可用于大量临床样本的K-ras基因突变筛查。

主权项

1、用于检测人类K-ras基因突变的引物及探针，其特征在于：包括：以下序列的引物对：(1)TGGTAGTTGGAGCTGA(SEQ ID NO：1)CTGCACCAGTAATATG(SEQ ID NO：2)(2)TGGTAGTTGGAGCTGC(SEQ ID NO：3)CTGCACCAGTAATATG(SEQ ID NO：4)(3)TGGTAGTTGGAGCTGT(SEQ ID NO：5)CTGCACCAGTAATATG(SEQ ID NO：6)(4)TGGTAGTTGGAGCTA(SEQ ID NO：7)CTGCACCAGTAATATG(SEQ ID NO：8)(5)TGGTAGTTGGAGCTC(SEQ ID NO：9)CTGCACCAGTAATATG(SEQ ID NO：10)(6)TGGTAGTTGGAGCTT(SEQ ID NO：11)CTGCACCAGTAATATG(SEQ ID NO：12)(7)TGGTGGAGCTGGTGA(SEQ ID NO：13)CTGCACCAGTAATATG(SEQ ID NO：14)和以下序列的探针：FAM-5’TCAAGGCGTGCCTTGACGATACAGCTCTGTAT 3’-TAMRA(SEQ ID NO：15)以及内控引物对5′-GCCTTCCCAACCATT-3′(SEQ ID NO：16)5′-CATTCCCCAAGAGCTTAC-3′(SEQ ID NO：17)和内控双环探针HEX-5’TTGTCATTGACAACGCTATGCTCCATAGC 3’-TAMRA(SEQ ID NO：18)