[发明专利]一种基因重组人铁蛋白轻链的制备方法

摘要

本发明公开了一种基因重组人铁蛋白轻链的制备方法。该方法包括PCR扩增人新鲜全血细胞中铁蛋白轻链(Ferritin L)的编码基因序列，经酶切和连接，克隆至表达载体pET-30a中，转化E.coli BL21(DE3)，鉴定阳性克隆菌落，经IPTG诱导表达蛋白Ferritin L，用Westernblot分析其抗原性。该方法成功地构建了FTL的原核表达载体，经大肠杆菌中诱导表达、纯化，得到较纯的铁蛋白轻链。经Westernblot证实，该蛋白具有良好的抗原性。

主权项

一种基因重组人铁蛋白轻链的制备方法，其特征在于包括以下步骤：(1)采用RT PCR技术从人血细胞中获得人铁蛋白轻链基因片段；(2)将步骤(1)中PCR获得的人铁蛋白轻链基因片段亚克隆到pGEM T载体上，转化感受态Top10细菌，然后接种于含氨苄青霉素的LB培养基，筛选阳性克隆菌株，提取阳性克隆菌株的质粒pGEM T/ferritin L，并进行测序鉴定；(3)以步骤(2)中的质粒pGEM T/FTL为模板，进行PCR扩增，然后对扩增产物进行双酶切，同时将空质粒pET 30a进行双酶切，分别回收并纯化酶切产物，用T4连接酶连接，获得表达载体，转化感受态大肠杆菌，然后接种于含卡那霉素的LB培养基，筛选阳性克隆菌株，提取阳性克隆菌株的表达质粒pET 30a/ferritin L，并进行测序鉴定；(4)用IPTG诱导蛋白表达，纯化铁蛋白轻链。