[发明专利]一种基于组合原理和PCR建立超大容量基因文库的新方法

摘要

酶的定向进化是改变酶的性质，提高其利用价值的有效途径。但现有的定向进化的方法都依赖已有基因，只能在已发现的基因基础上进行改造。因此，对于自然界中不存在或者新出现的筛选目标无能为力。本发明利用带有共用接头的随机片段，用PCR的方法将随机片段进行连接、组合和重聚，得到一个随机组合的庞大的基因文库。此文库在理论上包含了任意的基因序列，可以进行任意目标性状的筛选，从而可以创造新基因，突破了原来定向进化方法只能对现有基因进行改造的局限。本发明(建立超大容量基因文库)将使定向进化和医药体筛选不再受基因文库多样性有限的困扰，为筛选提供了一个巨大的资源库，对现有基因文库难以筛选的一些目标，如新的靶点受体的筛选，非自然条件酶的发现，新的靶标物质的检测等发挥积极的作用。

主权项

一种基于组合原理和PCR建立超大容量基因文库的新方法。步骤包括：(a)设计随机的DNA或者RNA序列，序列的两端有共用接头序列。(b)利用共用接头序列的互补，将随机序列在溶液中进行PCR重聚。(c)在重聚过程中或重聚过程后加入包含(a)中接头序列的特异性引物控制重聚产物的长度。(d)利用PCR手段用特异性引物对重聚产物进行扩增。(e)对(b)或(c)或(d)的DNA或者RNA产物用不对称PCR得到单链分子后，直接进行筛选，得到与目标物质相识别和特异性结合的DNA分子或者RNA分子。(f)对(b)或(c)或(d)的DNA产物进行片段回收，通过酶切、连接、转化等手段，筛选得到与目标物质相识别并特异性结合的蛋白质或有其它任何功能的蛋白质。