[发明专利]一种谷胱甘肽高产菌种的遗传改造方法无效
| 申请号： | 200910176777.2 | 申请日： | 2009-09-21 |
| 公开（公告）号： | CN101824432A | 公开（公告）日： | 2010-09-08 |
| 发明（设计）人： | 潘宏涛 | 申请（专利权）人： | 杭州康源饲料科技有限公司 |
| 主分类号： | C12N15/81 | 分类号： | C12N15/81;C12R1/84 |
| 代理公司： | 北京市盛峰律师事务所 11337 | 代理人： | 李贺香 |
| 地址： | 310004 浙江省杭州市费家*** | 国省代码： | 浙江;33 |
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| 摘要： | 本发明公开了一种以毕赤酵母Pichia pastoris为改造对象的谷胱甘肽高产菌种的遗传改造方法。所述的谷胱甘肽高产菌种的遗传改造方法包括四个步骤，所述的毕赤酵母Pichia pastoris本身具有很好的安全性，酵母培养基中不含有毒物质和致热源；发酵方法简便，发酵原料易得，节省能源，产量大，成本低；所述的方法选用的启动子GAP不需甲醇诱导，发酵工艺简单，其产量很高；所述的方法在菌种基因改造过程中，减少了前体物的使用，从而降低生产成本。 | ||
| 搜索关键词： | 一种 谷胱甘肽 高产 菌种 遗传 改造 方法 | ||
【主权项】：
一种谷胱甘肽高产菌种的遗传改造方法，其特征在于：步骤如下：第一步：从酿酒酵母S.cerevisiae INVSc1基因组模板中，扩增目的基因GSH1、GSH2，然后分别装入pGAPZA中，得到重组质粒pGAPZA-GSH1和pGAPZA-GSH2；第二步：以所述的重组质粒pGAPZA-GSH1和pGAPZA-GSH2为模板，采用DNA改组技术“体外快速进化”γ-L-谷氨酰-L-半胱氨酸合成酶和谷胱甘肽合成酶，得到质粒pGAPZA-GSH1M和质粒pGAPZA-GSH2M；第三步：以所述的质粒pGAPZA-GSH1M和质粒pGAPZA-GSH2M构建质粒pGAPZA-GSH1M-GSH2M和重组甲醇酵母；第四步：应用重组酵母发酵实验测定GSH的摩尔转化率。
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