[发明专利]一种适用于底泥中微生物群落结构分析的DNA提取方法无效
| 申请号： | 200910180630.0 | 申请日： | 2009-10-26 |
| 公开（公告）号： | CN101696410A | 公开（公告）日： | 2010-04-21 |
| 发明（设计）人： | 赵大勇 | 申请（专利权）人： | 河海大学 |
| 主分类号： | C12N15/10 | 分类号： | C12N15/10;C12Q1/68 |
| 代理公司： | 南京经纬专利商标代理有限公司 32200 | 代理人： | 李纪昌 |
| 地址： | 210098*** | 国省代码： | 江苏;32 |
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| 摘要： | 一种底泥中微生物群落结构分析的DNA提取方法，提取步骤为：用TENPbuffer清洗底泥样品，将清洗好的底泥样品悬浮于PBS buffer中；将预处理的底泥样品反复冻溶后加入溶菌酶，向底泥样品中加入蛋白酶K和十二烷基磺酸钠，所得样品在室温下离心后取上清液，向其中加入等体积的酚∶氯仿∶异戊醇混合液，振荡混匀，所得样品室温下离心后取液相，向液相中加入等体积的氯仿∶异戊醇混合液，所得样品室温下离心后取液相，向液相中加入预冷的异丙醇；所得样品离心去上清，向沉淀中加入预冷的乙醇洗涤沉淀三次，再离心去乙醇；将样品在空气中自然风干，用TE缓冲液溶解DNA保存。 | ||
| 搜索关键词： | 一种 适用于 底泥中 微生物 群落 结构 分析 dna 提取 方法 | ||
【主权项】：
一种底泥中微生物群落结构分析的DNA提取方法，其特征在于提取步骤为：a.用TENP buffer清洗底泥样品，将清洗好的底泥样品悬浮于PBSbuffer中；b.将经步骤a预处理的底泥样品在-80℃和65℃反复冻溶后加入溶菌酶，在37℃水浴1h，所述溶菌酶最终浓度为1mg/mL；c.向底泥样品中加入蛋白酶K和十二烷基磺酸钠，在55℃水浴1.5h，所述蛋白酶K最终浓度为0.2mg/mL，所述十二烷基磺酸钠最终浓度为1％(w/v)；d.步骤c所得样品在室温下离心后取上清液，向其中加入等体积的酚∶氯仿∶异戊醇混合液，振荡混匀，所述混合液中各物质的体积比为25∶24∶1；e.步骤d所得样品室温下离心后取液相，向液相中加入等体积的氯仿：异戊醇混合液，混合液中氯仿∶异戊醇的体积比为24∶1；f.步骤e所得样品室温下离心后取液相，向液相中加入预冷的异丙醇在-20℃沉淀2h；g.步骤f所得样品在4℃条件下离心去上清，向沉淀中加入预冷的乙醇洗涤沉淀三次，再离心去乙醇；h.将样品在空气中自然风干，用TE缓冲液溶解DNA保存于-20℃。
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