[发明专利]快速简易筛选多环芳烃降解菌的双层平板方法及其筛选平板

摘要

从环境样品中快速简易筛选多环芳烃降解菌的双层平板方法及其筛选平板：(1)采集多环芳烃污染土壤保存；(2)多环芳烃降解菌的富集：在以多环芳烃为唯一碳源的无机盐液体培养基中加入污染土壤避光摇床培养；(3)用双层平板进行初筛：下层为无机盐固体培养基，上层为以多环芳烃为唯一碳源的无机盐固体培养基；富集培养液涂布于双层平板培养，挑取在菌落周围形成透明水解圈的菌落接种于另一双层平板做划线分离，纯化出单菌落；(4)多环芳烃降解菌的复筛：选取降解率高的菌株作为高效降解菌。本发明能方便的通过筛选平板上的降解圈识别出多环芳烃降解菌。制作过程简单，且对环境污染小。本发明筛选到高效多环芳烃降解菌，降解率最高可达99％。

主权项

1、一种从环境样品中快速简易筛选多环芳烃降解菌的双层平板方法，其特征在于，步骤如下：(1).土壤样品的采集：采集多环芳烃污染土壤，保存；(2).多环芳烃降解菌的富集：在以多环芳烃为唯一碳源的无机盐液体培养基中加入污染土壤，避光摇床培养；每隔数天转接培养液至新鲜的以多环芳烃为唯一碳源的无机盐液体培养基中富集培养；(3).多环芳烃降解菌的初筛：利用双层平板进行多环芳烃降解菌的初筛，双层平板下层为无机盐固体培养基，上层为以多环芳烃为唯一碳源的无机盐固体培养基；将步骤(2)得到的富集培养液做梯度稀释，涂布于双层平板培养，挑取在菌落周围形成透明水解圈的菌落接种于另一双层平板做划线分离，最终纯化出单菌落；(4).多环芳烃降解菌的复筛：(4)-1.将初筛菌株接种于Luria-Bertani培养基中，培养至OD600约为0.6，离心去上清，用无机盐液体培养基洗涤并悬浮菌体；(4)-2.吸取菌悬液接入装有以多环芳烃为唯一碳源的无机盐液体培养基中，三角瓶中预先加入多环芳烃丙酮溶液，振荡使丙酮溶液完全挥发，培养基中多环芳烃终浓度为100mg/L；(4)-3.避光摇床培养14天；(4)-4.瓶内残留多环芳烃经萃取后，采用高效液相色谱测定残留量，选取降解率高的菌株作为高效降解菌。