[发明专利]一种利用球孢白僵菌几丁酶基因提高植物抗病性的方法

摘要

本发明涉及一种利用球孢白僵菌几丁酶基因提高植物抗病性的方法。该方法首先构建几丁酶基因组成型表达的植物表达载体，然后利用根癌农杆菌介导法将该基因导入番茄或棉花，实现其在番茄或棉花内的组成型表达，从而提高番茄和棉花的抗病性。应用本发明方法获得的转基因番茄可明显提高对早疫病的抗性；转基因棉花温室内接种非落叶型黄萎病菌后，病情指数可小于20，较野生型对照低80％左右。

主权项

一种利用球孢白僵菌几丁酶基因提高植物抗病性的方法，其特征在于，包括如下步骤：1)获得球孢白僵菌几丁酶基因Bbchit1：设计引物引入酶切位点后，以球孢白僵菌基因组DNA为模板进行扩增，扩增产物与pUC-T载体连接后转化大肠杆菌DH5α感受态细胞，筛选阳性克隆获得Bbchit1基因；2)构建组成型表达几丁酶基因植物表达载体：将Bbchit1基因插入植物表达载体P5，构建一个新的植物表达载体，命名为p5-35S-Bbchit1，组成型表达启动子为花椰菜花叶病毒CaMV35S启动子；3)利用根癌农杆菌介导法，将所述CaMV35S启动子控制下的球孢白僵菌几丁酶基因Bbchit1整合入植物基因组，实现Bbchit1基因在植物内的组成型表达，提高植物对真菌病害的抗病能力；4)将步骤3)获得的转基因植物进一步进行培养栽培、分子鉴定、人工气候室和温室内的抗病鉴定，获得抗病性提高的转基因植株。