[发明专利]应用毕赤酵母的pGAP调控表达转酮醇酶的方法无效
| 申请号： | 200910209771.0 | 申请日： | 2009-10-25 |
| 公开（公告）号： | CN101698835A | 公开（公告）日： | 2010-04-28 |
| 发明（设计）人： | 屈直;张爱联;张添元;尹慧祥;罗进贤 | 申请（专利权）人： | 中国热带农业科学院热带生物技术研究所 |
| 主分类号： | C12N9/10 | 分类号： | C12N9/10;C12N15/81;C12R1/84 |
| 代理公司： | 海口翔翔专利事务有限公司 46001 | 代理人： | 莫臻 |
| 地址： | 571101 *** | 国省代码： | 海南;66 |
| 权利要求书： | 查看更多 | 说明书： | 查看更多 |
| 摘要： | 本发明属生物技术领域，是一种应用毕赤酵母的pGAP调控表达转酮醇酶的方法，首先从毕赤酵母中扩增pGAP启动子；构建由pGAP调控转酮醇酶基因的毕赤酵母表达载体，并将这一载体转化毕赤酵母基因组；根据载体上所带的抗性基因筛选高拷贝重组子作为工程菌株；将工程菌株接种于含碳源的液体培养基中发酵工程菌分泌表达转酮醇酶。本发明生产成本低，发酵周期短，利用毕赤酵母的pGAP调控表达的转酮醇酶有利于产物的纯化，解决应用天然产转酮醇酶的菌株生产异淀粉酶的成本较高、产物难于纯化等的问题，有利于转酮醇酶的大规模生产。 | ||
| 搜索关键词： | 应用 酵母 pgap 调控 表达 转酮醇酶 方法 | ||
【主权项】：
一种应用毕赤酵母的pGAP调控表达转酮醇酶的方法，其特征在于，其步骤如下：1)、首先从毕赤酵母中扩增pGAP启动子；2)、在转酮醇酶序列的3’末端融合His6标签，构建由pGAP调控转酮醇酶基因的毕赤酵母表达载体，并将这一载体转化毕赤酵母基因组；3)、根据载体上所带的抗性基因筛选高拷贝重组子作为工程菌株；4)、将工程菌株接种于含碳源的液体培养基中，于28～30℃在生物反应器中发酵工程菌1～2d分泌表达转酮醇酶；所述液体培养基是由以下组分组成：85％磷酸25～28ml/L，CaSO4·2H2O 0.8～1.2g/L，K2SO4 17～19g/L，MgSO4·7H2O 13～16g/L，KOH 3.5～4.5g/L，碳源15～45g/L，蛋白胨18～22g/L，Yeast extract 8～12g/L，PTM4 3～5ml/L；所述PTM4是由以下组分组成：CuSO4·5H2O 2.0g/L，NaI·2H2O0.1g/L，MnSO4·H2O 3.0g/L，Na2MoO4·2H2O 0.2g/L，H3BO3 0.02g/L，CoCl2·6H2O 1.05g/L，ZnCl2 7.0g/L，Fe2(SO4)3·7H2O 22g/L，生物素0.2g/L，硫酸1ml/L。
下载完整专利技术内容需要扣除积分，VIP会员可以免费下载。
该专利技术资料仅供研究查看技术是否侵权等信息，商用须获得专利权人授权。该专利全部权利属于中国热带农业科学院热带生物技术研究所，未经中国热带农业科学院热带生物技术研究所许可，擅自商用是侵权行为。如果您想购买此专利、获得商业授权和技术合作，请联系【客服】
本文链接：http://www.vipzhuanli.com/patent/200910209771.0/，转载请声明来源钻瓜专利网。
