[发明专利]将人羊膜间充质细胞诱导分化成骨或软骨细胞的方法

摘要

本发明涉及了一种将人羊膜间充质细胞诱导分化成骨或软骨细胞的方法，它包括：从胎盘中分离出人羊膜组织；清洗上述人羊膜组织；消化清洗后的人羊膜组织；将上述人羊膜组织分离成单个人羊膜间充质细胞；将人羊膜间充质细胞扩增到所需的数目后，将上述人羊膜间充质细胞悬液中加入到含有5％FBS、10ng/mlTGF-β1、10ng/mlIGF、0.1μM地塞米松和50ng/ml抗坏血酸的高糖DMEM培养基进行诱导培养，每隔24小时更换上述培养基一次，诱导21天后，得到骨或软骨细胞；利用上述方法得到的骨或软骨细胞可以用于修复人体内的骨或软骨组织以治疗骨缺损。

主权项

一种将人羊膜间充质细胞诱导分化成骨或软骨细胞的方法，它包括：(1)在无菌条件下，从健康胎盘组织中分离出人羊膜组织，放入生理盐水中浸泡；(2)清洗上述人羊膜组织；(3)消化清洗后的人羊膜组织；(4)将上述人羊膜组织分离成单个人羊膜间充质细胞；(5)将人羊膜间充质细胞扩增到所需的数目后，加入DMEM/F12得到含有人羊膜间充质细胞的悬浊液，使人羊膜间充质细胞的个数为1×106个/ml-2×106个/ml；其特征在于：(6)将上述人羊膜间充质细胞悬液用含有20％FBS的α-MEM的培养基调整到人羊膜间充质细胞的个数为1×105个/ml，然后将其接种到24孔板中，待8-12小时细胞贴壁后，加入含有诱导液的高糖DMEM培养基进行诱导培养，诱导液含有：5％FBS、10ng/mlTGF-β1、10ng/mlIGF、0.1μM地塞米松和50ng/ml抗坏血酸，每隔24小时更换上述培养基一次，诱导21天后，得到骨或软骨细胞，然后种植到24孔板中，贴壁后可用于甲苯胺蓝染色鉴定或胶原免疫组化检测；(7)取出一部分从步骤(6)中得到的细胞进行甲苯胺蓝染色鉴定或胶原免疫组化检测，检测得到的细胞是否为骨或软骨细胞。