[发明专利]进境植物检疫性有害生物蔗扁蛾的快速鉴定方法

摘要

一种进境植物检疫性有害生物蔗扁蛾的快速鉴定方法，以蔗扁蛾特异性引物CF720/CR1113对待测样品基因组DNA提取液进行PCR扩增，取PCR扩增液于0.5×TBE电泳缓冲液中在5V/cm电压下电泳后，置于溴化乙锭染色盒中染色，在紫外凝胶成像仪上观察扩增条带，判断该待测样品是否为检疫性有害生物蔗扁蛾；该方法的鉴定时间由原来的一周以上缩至一天以内，鉴定准确性由原来的70％提高至99％，可帮助出入境检疫部门、海关等相关单位在口岸进行快速、准确、高效的检测鉴定。

主权项

一种进境植物检疫性有害生物蔗扁蛾的快速鉴定方法，其特征在于：该鉴定方法为以蔗扁蛾特异性引物CF720/CR1113对待测样品基因组DNA提取液进行PCR扩增，取PCR扩增液于0.5×TBE电泳缓冲液中在5V/cm电压下电泳后，置于溴化乙锭染色盒中染色，在紫外凝胶成像仪上观察扩增条带，判断该待测样品是否为检疫性有害生物蔗扁蛾；其中：上述PCR扩增液为PCR反应体系经PCR反应参数后的PCR扩增产物，总反应体系为25μl，各成分组成如下：10×PCR Buffer 2.5μl、各2.5mM的dNTP Mixture 2μl、10pM的蔗扁蛾特异性引物CF720/CR1113各1μl、5U/μl的Taq DNA聚合酶0.13μl、50ng/μl的DNA提取液2μl、灭菌双蒸水16.37μl；PCR反应参数是：94℃预变性4min；94℃变性20s，62℃退火20s，72℃延伸30s共30个循环；72℃延伸5min；最后4℃保存；上述蔗扁蛾特异性引物为：正向引物CF720：5‘-ATATATTTTAATTTTACCAGGATTCGGT-3’反向引物CR1113：5‘-TACTACATAGTAAGTATCGTGGAGAGAT-3’。