[发明专利]一种检测土壤精氨酸脱胺酶活性的方法

摘要

本发明涉及一种检测土壤精氨酸脱胺酶活性的方法：1)称取鲜土或预培养土壤样品n份于n(n≥4)个具塞三角瓶中，分别向三角瓶中加入精氨酸底物溶液，混匀后，塞上橡皮塞，恒温培养3h；2)培养结束后，向三角瓶中加入一定体积的氯化钾溶液，振荡，过滤；3)用靛酚蓝比色法测定生成的铵离子量；4)计算精氨酸脱胺酶活性。本发明的优点为：1)与传统生化测定方法相比，该方法简化了操作步骤；2)减轻了对高设备要求的依赖性，普通分光仪器就可以满足要求；3)准确度高，易操作；4)结果稳定可靠，重现性好。

主权项

一种检测土壤精氨酸脱胺酶活性的方法，其特征在于：1)分别称取n份5‑10g过1‑2mm筛的鲜土或预培养土壤样品于150mL三角瓶中，n≥4；向三角瓶中加入2～5mL 10～12mol/L的底物精氨酸溶液，使土壤与底物溶液混合均匀，于三角瓶上塞上不透气的橡皮塞；将其中n‑2个三角瓶于36‑38℃培养箱中恒温培养170‑190min，作为样品；余下的2个三角瓶于‑19‑‑21℃条件下恒温培养170‑190min，作为对照；培养结束后将对照三角瓶在室温条件下解冻；另取一三角瓶同时作试剂空白对照，即不加土壤，其余同样品处理；2)分别向上述三角瓶中加入40～60mL 1.5～2mol/L KCI溶液，塞上塞子，振荡55‑65min，过滤；3)分别吸取1～2mL滤液于显色试管中，加入3～5mL 1.5～2mol/L KCI溶液，1～3 mL 0.10～0.15mol/L苯酚钠溶液，0.5～2 mL次氯酸钠碱性溶液和1～3 mL 0.10～0.5mmol/L硝普纳溶液，混合均匀，在室温下显色50‑70min，在630nm处以试剂空白对照为比色零点，测定样品和对照的吸光值A；4)制作工作标准曲线，以铵态氮溶液的标准系列浓度和测定的吸光值A’制作工作标准曲线，得到斜率b；5)根据吸光值A和斜率b，计算所测三角瓶中溶液的铵态氮浓度S，S＝A*b；6)根据三角瓶中溶液的铵态氮浓度S，分别计算样品中铵态氮含量S1及对照中平均铵态氮含量S2；7)计算精氨酸脱胺酶活性计算公式：(S1‑S2)/W.T，单位mg NH4+‑N/g干土·3h式中：S1为样品中的NH4+‑N含量(mg)，S2为二个对照中的平均NH4+‑N含量(mg)，W为干土重(g)，T土样培养时间(h)。