[发明专利]一种非洲猪瘟病毒VP73基因的原核表达蛋白及其制备方法

摘要

本发明涉及的是一种基因工程制品的制备方法，具体地说是一种鉴定非洲猪瘟病毒抗体的VP73基因序列原核表达蛋白抗原及其制备方法。根据GenBank中非洲猪瘟病毒(ASFV)VP73基因序列，人工合成的VP73基因全长序列，构建了重组表达载体pET32a-VP73，测序验证后转化原核表达受体菌E.coli BL21(DE3)，IPTG诱导表达，重组融合蛋白分子量约65KD。经镍柱亲和层析纯化的蛋白能与ASFV阳性血清发生特异性的免疫印迹反应并且与猪瘟、猪细小、猪圆环、猪蓝耳、猪流感和猪伪狂犬等病毒血清无交叉反应。实验表明，表达的蛋白具有检测灵敏度高，特异性强，应用该抗原进行检测时绝无散毒危险，可作为鉴定非洲猪瘟病毒抗体的ELISA方法的检测抗原。

主权项

一种非洲猪瘟病毒VP73基因的原核表达蛋白，其特征是该重组表达蛋白为硫氧还蛋白与非洲猪瘟病毒VP73基因编码的融合蛋白，其中非洲猪瘟病毒VP73基因的核苷酸序列为：1    ATGGCATCCGGAGGAGCTTTTTGTTTGATTGCTAACGATGGAAAGGCCGACAAGATTATC61   TTGGCCCAAGACTTGTTGAACTCTAGAATTTCTAACATTAAAAATGTCAACAAATCCTAT121  GGTAAACCAGACCCAGAACCAACTTTGTCCCAAATCGAAGAAACACATTTGGTTCATTTC181  AATGCTCATTTTAAGCCTTATGTTCCAGTTGGATTCGAATACAATAAGGTTAGACCTCAT241  ACCGGTACCCCAACCTTGGGAAACAAATTGACCTTTGGTATTCCACAGTACGGAGACTTT301  TTCCATGATATGGTCGGACACCATATCTTGGGTGCATGTCATTCTTCCTGGCAGGATGCT361  CCTATTCAGGGTACCGCCCAGATGGGTGCCCATGGTCAGTTGCAAACCTTTCCTAGAAAC421  GGATATGACTGGGACAACCAAACACCTTTGGAGGGTGCCGTTTACACCTTGGTTGATCCA481  TTCGGAAGACCTATTGTTCCAGGAACAAAGAATGCTTACAGAAACTTGGTTTACTACTGC541  GAATACCCAGGAGAAAGATTGTATGAAAACGTTAGATTCGATGTTAATGGAAATTCCTTG601  GACGAATATTCCTCTGATGTCACAACCTTGGTCAGAAAATTTTGCATCCCAGGAGATAAA661  ATGACTGGATATAAGCACTTGGTCGGTCAGGAGGTTTCTGTCGAGGGAACTTCCGGACCT721  TTGTTGTGCAACATTCATGATTTGCACAAGCCTCACCAATCTAAACCTATTTTGACCGAT781  GAAAATGATACCCAGAGAACCTGCTCTCATACCAACCCTAAATTCTTGTCCCAACATTTT841  CCAGAGAACTCTCACAATATCCAAACAGCAGGTAAACAAGATATTACTCCTATTACCGAC901  GCAACCTATTTGGACATCAGAAGAAATGTTCATTACTCTTGTAATGGACCTCAAACCCCT961  AAATACTATCAGCCACCTTTGGCTTTGTGGATTAAGTTGAGATTTTGGTTCAACGAGAAC1021 GTCAACTTGGCTATTCCATCTGTTTCCATTCCATTCGGTGAGAGATTCATCACCATCAAA1081 TTGGCATCTCAAAAGGATTTGGTCAATGAATTTCCTGGATTGTTCATCAGACAGTCTAGA1141 TTCATCCCTGGAAGACCATCCAGAAGAAATATCAGATTCAAACCATGG