[发明专利]一种亲和素/链亲和素磁性复合微粒用于细胞分选的方法

摘要

本发明涉及一种利用亲和素/链亲和素磁性复合微粒用于对目的细胞分选的方法。该方法是在实验体系中加入生物素标记的单抗，磁粒通过亲和素/链亲和素与生物素标记的单抗结合，单抗与细胞表面相应抗原特异结合从而使细胞被磁粒捕获，达到纯化分离细胞的目的。由于生物素-亲和素，生物素-链亲和素具有系统特异性强、稳定性高、适用范围广、实验成本低的特点，所以得到的亲和素/链亲和素磁性复合微粒具有高生物素结合活性，在检测技术中标记量提高，且不易使生物分子变性失活，进一步提高了细胞分选的特异性。通过生物素与亲和素或链亲和素的特异结合能够高纯度的分选得到目的细胞，该方法不需要昂贵的仪器，且操作过程简单省时。

主权项

一种亲和素/链亲和素磁性复合微粒用于细胞分选的方法，该方法包括以下步骤：(1)亲和素/链亲和素磁性复合微粒的预处理将亲和素/链亲和素磁性复合微粒分散于平衡盐溶液中，磁性分离，弃上清；(2)封闭向步骤(1)产物中加入封闭剂，反应20-120分钟，再用pH＝7.4，0.02M的磷酸盐缓冲液、三羟甲基氨基甲烷-盐酸溶液或醋酸盐缓冲液清洗；(3)生物素化抗体与细胞的孵育取待分选的样本细胞，加入生物素抗体，室温反应10-60分钟，再以800rpm-1500rpm的转速离心5～10分钟，弃去上清中未结合的生物素抗体，将样本细胞重悬在偶联缓冲液中；(4)细胞分选(4.1)目的细胞和亲和素/链亲和素磁性复合微粒的结合将步骤(3)得到的结合有生物素抗体的待分选的样本细胞与经步骤(2)封闭处理后的亲和素/链亲和素磁性复合微粒混合，在20℃-35℃下孵育10-60分钟，间隔5-10分钟轻轻晃动反应管，使生物素与亲和素或者链亲和素充分的结合而将要分离的目的细胞固定在亲和素/链亲和素磁性复合微粒的表面；(4.2)清洗将步骤(4.1)的反应产物磁性分离，弃上清，加入清洗缓冲液，磁性分离，弃上清，洗去未结合的细胞。