[发明专利]MBD重组蛋白及其表达方法

摘要

本发明涉及MBD重组蛋白及其表达方法。本发明重组表达的MBD蛋白由564个氨基酸组成，分子量为63KDa，等电点为5.03；其表达方法是对人Mecp2的MBD区行密码子优化，并人工合成编码MBD的DNA，克隆至原核表达载体pCOLD-TF，转化大肠肝菌Rosetta-DE3，以IPTG在15℃诱导表达，镍柱亲和纯化。本发明解决了酵母和哺乳动物细胞等真核表达系统的操作繁琐、重组蛋白产量很低，以及高效表达依然困难、难以保留天然MBD蛋白特异性结合甲基化DNA的生物学功能等缺陷。本发明克服了大肠肝菌的密码子偏爱的缺点，显著降低了mRNA的二级结构，使得蛋白获得高表达，选择的原核表达载体pCOLD-TF以TF肽段与目的蛋白融合，提高了MBD的可溶性，保证了其与甲基化DNA结合的生物学活性。

主权项

MBD重组蛋白，其特征在于重组表达的MBD蛋白由564个氨基酸组成，分子量为63KDa，等电点为5.03；其序列如下：  1MNHKVHHHHH HMQVSVETTQ GLGRRVTITI AADSIETAVK SELVNVAKKV RIDGFRKGKV 61PMNIVAQRYG ASVRQDVLGD LMSRNFIDAI IKEKINPAGA PTYVPGEYKL GEDFTYSVEF121EVYPEVELQG LEAIEVEKPI VEVTDADVDG MLDTLRKQQA TWKEKDGAVE AEDRVTIDFT181GSVDGEEFEG GKASDFVLAM GQGRMIPGFE DGIKGHKAGE EFTIDVTFPE EYHAENLKGK241AAKFAINLKK VEERELPELT AEFIKRFGVE DGSVEGLRAE VRKNMERELK SAIRNRVKSQ301AIEGLVKAND IDVPAALIDS EIDVLRRQAA QRFGGNEKQA LELPRELFEE QAKRRVVVGL361LLGEVIRTNE LKADEERVKG LIEEMASAYE DPKEVIEFYS KNKELMDNMR NVALEEQAVE421AVLAKAKVTE KETTFNELMN QQASAGLEVL FQGPSAGLVP RGSGGIEGRH MDDDDKASAS481PKQRRSIIRD RGPMYDDPTL PEGWTRKLKQ RKSGRSAGKY DVYLINPQGK AFRSKVELIA541YFEKVGDTSL DPNDFDFTVT GRGS。