[发明专利]一种蛋白质分子印迹薄膜的制备方法

摘要

本发明公开了一种蛋白质分子印迹薄膜的制备方法，步骤是：1、制备蛋白质分子印迹膜的载体玻璃片的预处理：将盖玻片放入烧杯，加入清洗剂和去离子水，超声；2、模板蛋白、功能单体和交联单体溶液的配制：用磷酸盐缓冲液配制模板蛋白溶液，加入水溶性功能单体、交联单体和引发剂并混匀；3、在两块玻璃片间进行聚合反应，形成聚合物膜；4、模板蛋白分子的洗脱：将分子印迹膜放入烧杯中，吸取洗脱液加入其中，去除模板蛋白分子，得到与模板蛋白分子相匹配的印迹孔穴。本发明印迹过程中蛋白质不容易变性；聚合条件简单、温和。制备的分子印迹膜可发展成检测蛋白质的显色芯片。

主权项

一种蛋白质分子印迹薄膜的制备方法，其步骤是：(1)、制备蛋白质分子印迹膜的载体玻璃片的预处理：将盖玻片放入烧杯，加入1～5克的清洗剂于300～500mL去离子水中，超声5～20min；将盖玻片取出放入另一烧杯，经去离子水3～5次冲洗后，在1mol/L氢氧化钠溶液中浸泡并超声5～20min；取出盖玻片，用去离子水冲洗以除去残留在玻片上的氢氧化钠溶液，经3～5次冲洗后，加入去离子水超声5～20min；将离子水倒出，加入1mol/L HCl溶液浸泡，超声5～20min；取出盖玻片，用去离子水冲洗以除去残留在盖玻片上的HCl溶液，经3～5次冲洗后，加入去离子水超声5～20min；最后将上述盖玻片取出，晾干，备用；(2)、模板蛋白、功能单体和交联单体溶液的配制：用磷酸盐缓冲液配制浓度10-6～10-8M的牛血红蛋白溶液，称取与模板蛋白的摩尔数比达到400∶1水溶性功能单体如：丙烯酰胺、甲基丙烯酰胺、丙烯酸、甲基丙烯酸等加到1mL蛋白溶液中，混匀，于冰箱中4℃放置过夜，再加入N，N′-亚甲基双丙烯酰胺，超声脱气5～10min，通氮气5～10min后，依次加入引发剂5～10μL，与功能单体的摩尔比在500～1000之间和催化剂1μL，混匀；(3)、在两块玻片间进行聚合反应：将步骤(2)中的蛋白质模板分子、功能单体、交联单体和引发剂混匀后，用移液器吸取30～50μL缓缓滴加在载玻片上，盖上盖玻片，使液滴全被盖住，聚合2-3小时，成膜后揭开盖玻片，得到与盖玻片面积一样的聚合物膜；(4)、洗脱模板蛋白分子：将分子印迹膜放入烧杯中，每次吸取2mL洗脱液加入其中，摇动3-4小时后测其紫外-可见吸光值，直到检测不到吸收峰为止，最后用去离子水冲洗掉残留在膜上的洗脱剂，通过测洗脱液中蛋白的含量，来判断洗脱液的洗脱效率；(5)、按(1)、(2)、(3)、(4)步骤制备非印迹膜，在制备聚合物膜的过程中不加入模板蛋白分子；(6)、分子印迹膜对目标蛋白的吸附量的计算方法：将经过洗脱过程的MIPM和NIPM分别放入加有重结合模板蛋白溶液的6孔板中，每隔15～60min利用紫外/可见分光光度计测量6孔板中重结合模板蛋白溶液的吸光度值，根据吸附量公式计算分子印迹膜和非分子印迹膜对蛋白的吸附量，吸附量：Q吸＝(CO-C余)×V/S，其中Q吸为MIPM和NIPM吸附模板蛋白的吸附量；CO为重结合模板蛋白溶液的浓度；C余为结合2小时后6孔板中重结合模板蛋白溶液的浓度；(7)、分子印迹膜的选择性吸附评价方法：将MIPM和NIPM分别放入分别盛有不同种类蛋白溶液：鸡蛋清溶菌酶，牛血清蛋白，肌红蛋白，牛血红蛋白的6孔板中，静置放置4小时后，利用紫外/可见分光光度计测量6孔板中不同种类重结合蛋白溶液的浓度，计算吸附量，通过印迹因子α的值来评价印迹膜对模板蛋白的识别性能，α值＝QMIPM吸/QNIPM吸，式中：QMIPM吸为印迹膜对某种蛋白质溶液的吸附容量；QNIPM吸为非印迹膜对某种蛋白质溶液的吸附容量。