[发明专利]三尖杉离体胚培养及植株再生方法

摘要

本发明提供一种三尖杉离体胚培养及植株再生方法，属于三尖杉的培养技术。本发明要解决现有技术中三尖杉种子休眠时间长、苗时间长、出苗率低，因此很难获得理想的发芽率和更多的健壮苗的问题，选取当年籽粒饱满的种子为材料，经过诱导培养，15～20天胚即可萌发出生长健壮的新芽；再经过20～25天的增殖，25～30天诱导生根后即可成苗、移栽，成活率高达90％以上；扩繁系数高，苗木成活后长势良好，健壮挺拔。

主权项

1.一种三尖杉离体胚培养及植株再生方法，其特征在于：所述方法的具体步骤包括：1)取材方法：选取当年籽粒饱满的三尖杉种子，采摘后用湿布包好，置于4℃下暂存；2)培养基的配制：在基本培养基为MS中分别添加生长激素：IBA、NAA、IAA、玉米素ZE或KT中的几种，分别配置成芽诱导培养基、芽增殖培养基和生根培养基，所述这些培养基中还加入有Su为25g/L，Ag+为7～7.5g/L，PH值为5.8，附加物为活性炭Ac；所述这些培养基的厚度为1.4～1.6cm；3)材料消毒处理：将4℃下暂存的三尖杉种子用洗涤剂漂洗干净，用自来水滴冲3个小时，在超净工作台内用重量浓度为75％的酒精消毒消毒30秒钟，用0.1％升汞HgCl2消毒15分钟，无菌水冲3～4遍，消毒滤纸吸干表面水分；4)诱导培养：用眼科镊和手术刀在无菌的条件下取生长饱满的胚，直接接种于所述芽诱导培养基上；100～150g的芽诱导培养基接种3个胚；所述诱导培养的培养条件：培养室温度为25±2℃，光照时间14～16h/d，光照强度1500～2000Lx；诱导培养的时间15～20天；5)增殖培养：将经过步骤4)诱导培养的生长健壮的三尖杉幼苗切成带腋芽的茎段，接种在所述芽增殖培养基中，进行大量繁殖；100～150g的增殖培养基接种3个胚；所述增殖培养的培养条件：培养室温度为25±2℃，光照时间14～16h/d，光照强度1500～2000Lx；增殖培养的时间20～25天；6)诱导生根：将步骤5)增殖培养出来的长到3cm以上的无根幼苗单株切下，带有2～3片叶子，转移到所述生根培养基中；100～150g的生根培养基接种3个胚；所述生根培养的培养条件：培养室温度为25±2℃，光照时间14～16h/d，光照强度1500～2000Lx；生根培养的时间25～30天；7)试管苗完成：当试管苗长至3～4cm高，有2～3条形态正常的根，有完整须根，长度2～3cm时，完成三尖杉胚的离体培养及植株再生试管苗培养。