[发明专利]体外连接和组合装配核酸分子的方法在审
| 申请号： | 200980113021.1 | 申请日： | 2009-02-13 |
| 公开（公告）号： | CN102016070A | 公开（公告）日： | 2011-04-13 |
| 发明（设计）人： | J·C·文特尔;D·G·吉布森;H·O·史密斯;C·A·哈奇森三世;L·扬 | 申请（专利权）人： | 合成基因组公司 |
| 主分类号： | C12Q1/68 | 分类号： | C12Q1/68;C12P19/34 |
| 代理公司： | 北京纪凯知识产权代理有限公司 11245 | 代理人： | 赵蓉民;陆惠中 |
| 地址： | 美国加利*** | 国省代码： | 美国;US |
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| 摘要： | 本发明涉及体外连接两个或更多个感兴趣的双链(ds)或单链(ss)DNA分子的方法，其中每对的第一DNA分子的远端区域和第二DNA分子的近端区域共享序列同一性区域。所述方法允许以预先确定的顺序和方向连接大量DNA片段，而不使用限制酶。其可以用来例如连接感兴趣的基因或基因组合成产生的亚片段。还公开了用于进行所述方法的试剂盒。连接DNA分子的方法可以用来产生组合文库，所述组合文库用于通过密码子优化、基因优化和途径优化产生例如最佳蛋白表达。 | ||
| 搜索关键词： | 体外 连接 组合 装配 核酸 分子 方法 | ||
【主权项】：
连接一组两个或更多个双链(ds)或单链(ss)DNA分子的体外方法，其中待连接的邻近DNA分子在其末端处含有重叠序列，所述方法包括将所述两个或更多个DNA分子在有效连接所述两个或更多个DNA分子以在一步反应中形成第一装配dsDNA分子的条件下在单个容器中在体外与下列接触(a)缺少3′核酸外切酶活性的分离的非热稳定5′至3′核酸外切酶，(b)群集剂，(c)具有3′核酸外切酶活性的分离的热稳定非链置换DNA聚合酶，或者所述DNA聚合酶与缺少3′核酸外切酶活性的第二DNA聚合酶的混合物，(d)分离的热稳定连接酶，(e)dNTP的混合物，以及(f)适合的缓冲液。
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