[发明专利]大范围核酸酶重组系统

摘要

本发明涉及一组基因构建体，其通过采用大范围核酸酶在基因组的特定位置产生双链断裂并因而刺激所述基因组位点与转染供体序列之间在该基因座的同源重组事件，从而在基因组的固定位置高效地并可重复性地引入特定的核苷酸序列。本发明还涉及使用这些构建体的方法和试剂盒形式的这些材料。

主权项

一组基因构建体，其包括：a)构建体(i)，其由至少包含以下组分的核酸分子编码：A1‑A2‑A3‑A4‑A5(i)其中A1是第一启动子；A2是第一同源部分；A3是大范围核酸酶切割位点；A4是第一标记基因；A5是第二同源部分；并且其中构建体(i)被设置成稳定整合进至少一个靶细胞的基因组中；b)构建体(ii)，其由至少包含以下组分的核酸分子编码：A2’‑B1‑B2‑B3‑B4‑A5’(ii)其中A2’包含所述第一同源部分A2的一部分；B1为与所述第一标记基因不同的第二标记基因；B2是第二启动子；B3是多克隆位点；B4是第三启动子；A5’包含所述第二同源部分A5的一部分；c)至少一种构建体，其选自包含以下的组：构建体(iii)或(iv)，其由至少包含以下组分的核酸分子编码：C1‑C2(iii)；C3(iv)；或构建体(v)，其为至少包含以下组分的分离或重组蛋白质：C4(v)；其中C1是第四启动子；C2是大范围核酸酶的开放阅读框(ORF)；C3是所述大范围核酸酶的信使RNA(mRNA)形式；C4是所述大范围核酸酶的分离或重组蛋白质；其中来自构建体(iii)、(iv)或(v)的所述大范围核酸酶识别并切割A3；并且其中构建体(iii)、(iv)或(v)被设置成与构建体(ii)共转染进所述至少一个靶细胞中。