[发明专利]检测重金属胁迫下核仁纤维蛋白定位的免疫荧光方法

摘要

本发明公开了一种检测重金属胁迫下植物细胞核仁纤维蛋白定位的免疫荧光方法。它是切取重金属处理后的植物根尖分生组织细胞，于4％多聚甲醛中固定1h；采用酶液酶解后；用滴管吸取约0.1ml样品液，均匀涂于载玻片上分散成单个细胞，标记后自然风干，放在1％TritonX-100浸泡15分钟；然后滴入15μl配好的一抗，盖上盖玻片，37℃温箱孵育1h；再滴入15μl配好的二抗，处理后滴加15μl DAPI，最后滴加5μl防淬灭剂于载玻片材料上，盖上盖玻片，用指甲油将盖玻片四周封好，1h后在荧光显微镜下观察。本发明的检测方法具有特异性高、实验结果准确，大大提高了观察细胞数目等特点。该方法为探讨重金属毒害细胞机理提供了精确的检测方法，其检测方法具有广阔的应用前景。

主权项

一种快速检测重金属胁迫下植物细胞核仁纤维蛋白定位的免疫荧光方法，其特征在于，按如下的步骤进行：(1)切取重金属处理后的植物根尖分生组织细胞，于4％多聚甲醛中固定1-2h；经PBS缓冲液洗；(2)采用2.5％纤维素酶+2.5％果胶酶酶液于37℃温箱酶解；经PBS缓冲液洗涤后压片；(3)将植物根尖转至离心管中，滴加PBS缓冲液，手摇震荡至多数细胞游离状态，用滴管吸取约0.1-0.2ml样品液，均匀涂于载玻片上分散成单个细胞，标记后自然风干后备用；(4)将(3)得到的载玻片放在1％TritonX-100浸泡15-20分钟；经PBS缓冲液洗涤；(5)在(4)得到的载片上滴入15-20μl配好的一抗，盖上盖玻片，37℃温箱孵育1h-1.5h；再经PBS缓冲液洗涤；(6)再将(5)得到的载片上滴入15-20μl配好的二抗，盖上盖玻片，37℃温箱孵育45min-1h；经PBS缓冲液洗涤；(7)再将(6)的载玻片上滴加15-20μl DAPI，盖上盖玻片；经PBS缓冲液洗涤；(8)用滤纸吸干多余PBS，滴加5-10μl防淬灭剂于载玻片材料上，盖上盖玻片，用指甲油将盖玻片四周封好，1-2h后在荧光显微镜下观察。