[发明专利]一种食品过敏原甲壳类基因的恒温扩增检测试剂盒及检测方法

摘要

本发明提供一种食品过敏原甲壳类基因的恒温扩增检测试剂盒及检测方法。该试剂盒，包括：DNA裂解液和恒温扩增反应液；所述恒温扩增反应液包括正向外围引物、反向外围引物、两条探针、一条交叉扩增引物、1×Thermol buffer、MgSO4、dNTPs、Bst DNA聚合酶和无菌双蒸水；本发明还提供用所述试剂盒检测食品过敏原甲壳类基因的方法，包括下列步骤：用DNA裂解液从待检测的标本中提取DNA；进行扩增反应；检测。该检测方法准确、灵敏，能够快速地检测食品过敏原甲壳类基因，适合于现场快速检测。

主权项

1.一种食品过敏原甲壳类基因的恒温扩增检测试剂盒，其特征是包括如下部分：a)DNA裂解液：pH8.0、浓度为10mmol/L的Tris-HCl缓冲液，含有质量浓度为1％的chelex树脂；b)恒温扩增反应液：包含正向外围引物、反向外围引物、两条探针、一条交叉扩增引物、1×Thermolbuffer、MgSO₄、dNTPs、BstDNA聚合酶和无菌双蒸水；其中：所述的正向外围引物序列为5’-GATTAAGTTACTTTAG-3’；所述的反向外围引物序列为5’-GATTTAAAGGTCGAACAG-3’；所述的两条探针的序列分别为：5’-TTCAACATCGAGGTCGC-3’和5’-TGTCGATATGAACTCTC-3’，其中一条探针的5’端标记生物素，另外一条探针5’端标记FitC；所述的交叉引物为：5’-TTCAACATCGAGGTCGCTTTAGGGATAACAGCGT-3’；所述的1×Thermolbuffer含有摩尔浓度为20mM的Tris-HCl、10mM的KCl、10mM的(NH₄)₂SO₄、2mM的MgSO₄以及质量浓度为0.1％的TritonX-100，pH8.8。