[发明专利]一种用枯草芽孢杆菌提取的活性成分及其应用

摘要

本发明涉及一种用枯草芽孢杆菌提取的活性成分及其应用，属于微生物农药领域。用枯草芽孢杆菌提取活性成分的工艺为：生产菌株为枯草芽孢杆菌Bacillussubtilis C2，保藏号：CGMCC No：3586。将菌种用液体发酵，培养基为：蛋白胨5g、牛肉膏3g、NaCl 5g、琼脂15g、蒸馏水1000ml、pH 7.2；发酵条件为：温度25-40℃、转速为150-250rpm、摇床培养2-5天；所得发酵液减压浓缩得粗浸膏；粗浸膏依次用硅胶H、C18、SephadexLH-20分离得到活性成分C。本发明的活性成分是具有能使在常规培养基下培养的真菌高效、快速形成厚垣孢子的代谢物，且用量少，应用于生物农药制备中。

主权项

一种用枯草芽孢杆菌发酵液中提取的活性成分，其特征在于活性成分经如下步骤得到：a.生产菌株为枯草芽孢杆菌Bacillus subtilis C2，该菌株已于2010年1月20日保存于中国微生物菌种保藏委员会普通微生物中心，地址：中国.北京.中关村；保藏号：CGMCC No：3586；b.枯草芽孢杆菌的液体培养基配方为：蛋白胨5g、牛肉膏3g、NaCl 5g、琼脂15g、蒸馏水1000ml、pH7.2；c.枯草芽孢杆菌的发酵条件为：每瓶装100-300ml液体培养基，温度25-40℃、转速为150-250rpm，摇床培养2-5天；d.将含有菌体的发酵液在45℃下减压浓缩至原体积的十分之一，用正丁醇萃取3次，正丁醇萃取部分在45℃下减压浓缩至干，得粗浸膏；e.将粗浸膏在硅胶H柱上，先用体积比为1-4∶1的乙酸乙酯和甲醇的混合溶剂洗脱，然后用甲醇全部冲下，将甲醇冲下部分在45℃下减压浓缩得A馏分；f.将A馏分用C18填料分离，依次用50-70％、100％的甲醇：水洗脱，将100％甲醇洗脱部分合并，在45℃下减压浓缩得B馏分；g.将B馏分用SephadexLH-20在甲醇下洗脱，每15秒接1滴，每瓶收集液体1ml，将11-16瓶合并，得到枯草芽孢杆菌的活性成分C。