[发明专利]一种重组抗菌肽及其基因工程制备方法和应用无效
| 申请号： | 201010151996.8 | 申请日： | 2010-04-14 |
| 公开（公告）号： | CN102220255A | 公开（公告）日： | 2011-10-19 |
| 发明（设计）人： | 彭永鹤;李永新;林美娟 | 申请（专利权）人： | 深圳市圣西马生物技术有限公司 |
| 主分类号： | C12N1/19 | 分类号： | C12N1/19;C12N15/12;C12N15/81;C07K14/47;A23K1/16;A23L3/3526;A01N63/04;A61K38/17;A01P1/00;A01P3/00;A61P31/04;A61P31/10;A61P31/12 |
| 代理公司： | 暂无信息 | 代理人： | 暂无信息 |
| 地址： | 518057 广东省深圳市南山区高*** | 国省代码： | 广东;44 |
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| 摘要： | 本发明提供一种重组抗菌肽工程菌的制备方法及其应用，属于生物基因工程技术领域，包括抗菌肽基因的扩增，基因克隆，啤酒酵母转化，重组蛋白的高效表达和纯化。本发明的重组抗菌肽为猪源抗菌肽Cathelicidins家族PAMP-36，其蛋白含有如序列工D No.2所示的短肽。本发明制得的重组抗菌肽可用于生产饲料添加剂、兽药、防腐剂，以及用于制备革兰氏阴性菌，革兰氏阳性菌，真菌或病毒感染引发的疾病的药物。 | ||
| 搜索关键词： | 一种 重组 抗菌 及其 基因工程 制备 方法 应用 | ||
【主权项】：
1.重组抗菌肽PMAP-36的工程菌以及产物的制备方法，其特征在于其操作步骤为：A.PMAP-36基因的获得和扩增：参照![]()
LS(Invitrogen)试剂盒说明书，从母猪的股骨骨髓中提取基因组RNA。在人工合成引物的存在下，通过RT-PCR获得编码PMAP-36的基因片段。B.基因克隆和转化大肠杆菌：回收PCR产物，用T4连接酶与PMD18-T载体连接。转化大肠杆菌TOP10感受态细胞，经抗性培养基筛选后，获得具有正确编码序列的PMAP-36基因。C.酿酒酵母表达载体构建和转化：分别用限制性内切酶XbaI和HindIII双酶切重组质粒和酵母穿梭质粒pVT102U/α。回收酶切产物，用T4DNA连接酶连接，构建重组表达质粒PVT-PMAP36，用电转的方法转入酿酒酵母S78，获得阳性转化子S78-PMAP36。D.将工程菌扩大培养，纯化蛋白：
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