[发明专利]基于荧光共振能量转移的多组分同时检测的均相免疫分析方法

摘要

本发明提供了一种基于荧光共振能量转移的多组分同时检测的均相免疫分析方法，该方法利用作为能量受体的荧光物质的多色性建立了一种基于荧光共振能量转移(FRET)的均相荧光免疫分析(FIA)的新方法，实现了对多组分抗原的同时检测。本发明将作为能量供体的荧光物质或化学发光物质以及作为能量受体的荧光物质分别标记需要检测的几种抗原和相应的抗体，抗原抗体的特异性结合使得能量供体和受体之间距离缩短，从而发生从能量供体到受体的FRET，根据受体的荧光强度变化得出样品中抗原浓度，是一种快速、灵敏、多组分同时检测的均相免疫分析新方法。

主权项

基于荧光共振能量转移的多组分同时检测的均相免疫分析方法，其特征在于，以高量子产率的荧光物质或化学发光物质为能量供体，以两种或两种以上宽激发的荧光染料为能量受体，按下列步骤操作：步骤一：用同一种所述的能量供体标记两种或两种以上待测抗原，用不同的能量受体分别标记相应的两种或两种以上的抗体，或用所述的两种或两种以上的能量受体分别标记两种或两种以上的待测抗原，用一种所述的能量供体标记相应的两种或两种以上抗体，得到标记组分，且所述的作为能量供体和能量受体的荧光物质为符合FRET特征的试剂对；步骤二：配制五个已知浓度梯度的两种或两种以上待测抗原溶液，令步骤一得到的标记组分与该已知浓度梯度的两种或两种以上待测抗原溶液进行均相竞争免疫反应，反应过程如下：将步骤一得到的标记组分与待测抗原溶液在pH 6-8的缓冲液中混合均匀，25℃温育30分钟，得到混合体系；步骤三：免疫反应完成后，以所用能量供体的最大激发波长为激发光，以所用的不同能量受体的发射波长检测混合体系的荧光强度，得到各种能量受体的荧光光谱数据；步骤四：依据各种能量受体的荧光光谱数据，采用去卷积法，计算得到所用能量受体的相对荧光强度；步骤五：制作待测抗原的标准曲线，进行公式拟合，分别得到各种待测抗原浓度的计算公式；步骤六：令未知浓度的两种或两种以上待测抗原与标记组分重复以上步骤二、步骤三、步骤四，将最终得到的相对荧光强度代入上述步骤五得到的拟合公式中计算即得到各待测抗原的浓度。