[发明专利]一种建立巨桉四倍体植株的诱导及培育体系的方法

摘要

本发明公开了一种建立巨桉四倍体植株的诱导及培育体系的方法。该方法的步骤包括：(1)将巨桉无菌组培苗的带有腋芽或顶芽的茎段置于装有处理液的容器中，所述处理液中含有秋水仙素和助剂SD；将容器密闭后置于摇床上振荡，在35～40℃条件下加倍处理12～18小时；然后使用无菌水冲洗茎段，除去秋水仙素残留液，得到经过加倍处理的茎段；(2)将经过加倍处理的茎段接种到增殖培养基中进行培养，每隔15～20天即转接到新配制的增殖培养基中，转接3～5次后再进行生根培养。本发明创新之处是将助剂SD用到诱导过程，既可使用较低的秋水仙素浓度，节省用量，降低成本，又能显著提高诱导率，由现有的20％～30％提高到60～65％。

主权项

一种建立巨桉四倍体植株的诱导及培育体系的方法，其特征在于包括以下操作步骤：(1)将巨桉无菌组培苗带有腋芽或顶芽的茎段置于装有处理液的容器中，所述处理液含有质量百分比浓度为0.1～0.5％的秋水仙素和质量百分比浓度为5～12％的助剂SD；将容器密闭后置于摇床上以80～120r/min的振荡速度，在35～40℃条件下加倍处理12～18小时；处理完毕后，使用无菌水冲洗茎段，直至完全除去秋水仙素残留液，得到经过加倍处理的茎段；(2)将经过加倍处理的茎段接种到增殖培养基中进行培养，每隔15～20天即转接到新配制的增殖培养基中，转接3～5次后再进行生根培养；所述增殖培养基由以下按质量体积比计的组分组成：硝酸钙537～576mg/L，硝酸钾480～520mg/L，硫酸镁355～390mg/L，磷酸二氢钾150～190mg/L，氯化钙77～116mg/L，硫酸锰20.2～24.5mg/L，硫酸锌7.7～11.6mg/L，硼酸5.4～7.2mg/L，硫酸铜0.018～0.029mg/L，钼酸钠0.19～0.38mg/L，硫酸亚铁25.3～29.4mg/L，乙二胺四乙酸二钠35.3～38.6mg/L，根皮苷2～4mg/L，盐酸硫胺素0.092～0.112mg/L，盐酸吡哆辛0.41～0.58mg/L，烟酸0.39～0.61mg/L，甘氨酸1.5～2.4mg/L，肌醇91～112mg/L，核黄素5.0～7.0mg/L，激动素0.4～0.6mg/L，萘乙酸0.15～0.25mg/L，琼脂6100～6800mg/L和蔗糖30000～45000mg/L，余量为蒸馏水；所述步骤(1)和步骤(2)是在无菌条件下进行操作。