[发明专利]一种敲除分枝杆菌ksdD基因的方法及其应用无效
| 申请号： | 201010176347.3 | 申请日： | 2010-05-19 |
| 公开（公告）号： | CN101864441A | 公开（公告）日： | 2010-10-20 |
| 发明（设计）人： | 饶志明;韩冷;田灵芝;夏海锋 | 申请（专利权）人： | 江南大学 |
| 主分类号： | C12N15/63 | 分类号： | C12N15/63;C12N1/21;C12R1/32 |
| 代理公司： | 暂无信息 | 代理人： | 暂无信息 |
| 地址： | 214122 江苏*** | 国省代码： | 江苏;32 |
| 权利要求书： | 查看更多 | 说明书： | 查看更多 |
| 摘要： | 一种敲除分枝杆菌ksdD基因的方法及其应用，属于生物工程中分子生物学领域。分枝杆菌(Mycobacterium)能将植物甾醇转化为药物中间体4-烯-雄甾-3，17-二酮(AD)和1，4-二烯-雄甾-3，17-二酮(ADD)，其中由ksdD基因编码的3-甾酮-Δ1-脱氢酶(KSDD)是AD转化为ADD的关键酶。本发明以本实验室保藏的一株分枝杆菌为出发菌株，首先扩增出长度约1.7kb编码KSDD的ksdD基因全序列，在基因内部插入一段来源于质粒pET28a的卡那霉素抗性基因(Km)，将得到的基因元件ksdD::Km电转化分枝杆菌，通过PCR验证获得稳定遗传的ksdD基因缺失重组转化子。经检测转化子的比酶活为15.6mu/mg，而原始菌株比酶活为105.4mu/mg，转化子与原始菌株相比，其KSDD酶活性下降了85％。在研究转化子对甾醇的转化情况时，以原始菌株作为对照。两者相比较，转化子AD产量提高了1倍，而ADD产量下降了35.2％。 | ||
| 搜索关键词： | 一种 分枝杆菌 ksdd 基因 方法 及其 应用 | ||
【主权项】：
构建了分枝杆菌ksdD基因敲除载体T-ksdD::Km，其特征是以能够转化甾醇产生AD(D)的分枝杆菌染色体为模板PCR扩增出ksdD基因，连接PMD18-T载体后获得T-ksdD质粒，将以PET28a质粒为模板扩增出的卡那抗性基因Km插入ksdD基因中问获得基因敲除质粒T-ksdD::Km。
下载完整专利技术内容需要扣除积分，VIP会员可以免费下载。
该专利技术资料仅供研究查看技术是否侵权等信息，商用须获得专利权人授权。该专利全部权利属于江南大学，未经江南大学许可，擅自商用是侵权行为。如果您想购买此专利、获得商业授权和技术合作，请联系【客服】
本文链接：http://www.vipzhuanli.com/patent/201010176347.3/，转载请声明来源钻瓜专利网。
