[发明专利]重组人表皮生长因子工程菌的构建方法无效
| 申请号： | 201010195640.4 | 申请日： | 2010-06-09 |
| 公开（公告）号： | CN101857865A | 公开（公告）日： | 2010-10-13 |
| 发明（设计）人： | 于冲;夏海华 | 申请（专利权）人： | 黑龙江省科学院微生物研究所 |
| 主分类号： | C12N15/12 | 分类号： | C12N15/12;C12N15/63;C12N1/21;C12R1/19 |
| 代理公司： | 哈尔滨市松花江专利商标事务所 23109 | 代理人： | 金永焕 |
| 地址： | 150010 黑龙*** | 国省代码： | 黑龙江;23 |
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| 摘要： | 重组人表皮生长因子工程菌的构建方法，它涉及表皮生长因子工程菌的构建方法。它解决了现有重组人表皮生长因子的纯化困难、产量低和生物活性低问题。方法：一、根据大肠杆菌偏爱密码子设计重组hEGF人工序列，合成序列并获得pMD-OmpA-hEGF；二、pMD-OmpA-hEGF和pSE分别经XhoI和EcorI进行双酶切，回收所需目的片段，连接并构建质粒pSE-OmpA-hEGF；三、将质粒pSE-OmpA-hEGF转化到大肠杆菌BL21-Codon plusTM中，即完成。本发明中原核表达系统的遗传背景清楚，易于改造，工艺简单，成本低，流程短，产量高，获得的蛋白易于纯化，蛋白的纯度高和生物活性高。 | ||
| 搜索关键词： | 重组 表皮 生长因子 工程 构建 方法 | ||
【主权项】：
重组人表皮生长因子工程菌的构建方法，其特征在于重组人表皮生长因子工程菌的构建方法按以下步骤进行：一、根据大肠杆菌偏爱密码子设计重组hEGF人工序列，然后合成重组OmpA-hEGF人工序列，再将重组OmpA-hEGF人工序列连接到质粒pMD上，合成出质粒pMD-OmpA-hEGF；二、质粒pMD-OmpA-hEGF和质粒pSE分别经XhoI和EcorI进行双酶切，回收所需目的片段，连接并构建质粒pSE-OmpA-hEGF；三、将质粒pSE-OmpA-hEGF转化到大肠杆菌BL21-Codon plusTM中，即完成重组人表皮生长因子工程菌的构建；其中步骤一中根据大肠杆菌偏爱密码子重组hEGF人工序列的基因序列如下：CCCTCGAGTTAACGCAGTTCCCACCATTTCAGGTCACGGTACTGGCAACGTTCACCGATGTAACCAACAACACAGTTGCACGCGTATTTGTCCAGAGCTTCGATATACATGCAAACACCATCGTGTAGGCAGTAACCGTCGTGAGACAGCGGGCATTCAGAGTCGGAATTGGCCTGCGCTACGGTAGCGAAACCAGCCAGTGCCACTGCAATCGCGATAGCTGTCTTTTTCATGAATTCCG。
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