[发明专利]猕猴成体肝脏前体细胞的分离及培养方法

摘要

猕猴成体肝脏前体细胞的分离和培养方法，属于动物前体细胞分离及培养液，特别是猕猴成体肝脏前体细胞的分离及培养液。本发明将猕猴肝脏切除手术或其他途径得到的少量肝脏组织，用IV型胶原酶将组织块消化，收集细胞悬浮于10％胎牛血清DMEM中培养、挑出单个细胞团块接种于大鼠鼠尾胶原铺板的培养板，培养液为专用的培养液，经培养的细胞用流式细胞术分选E-cad+细胞获得目的细胞。本方法分离得到的细胞可用于细胞分化机制研究，并可能成为细胞替代治疗晚期肝脏疾病的理想种源细胞。

主权项

一种猕猴成体肝脏前体细胞的分离和培养方法，包括以下步骤：(1)取5-10克的猕猴成体肝脏组织，用PBS浸泡洗涤3次，剪成小块，用含5mg/ml的IV型胶原酶的DMEM消化组织块30～60分钟；(2)收集上清液中的细胞，用DMEM洗三次后以1200转/分速度离心5分钟；(3)将收集到的细胞置于10％胎牛血清DMEM的密封离心管中悬浮培养，以形成细胞团块；(4)挑出单个的细胞团块，接种于大鼠鼠尾胶原铺板的培养板；(5)细胞培养液含有10mmol/L nicotinami de，1x I TS，100U/mlpenicillin，100μg/ml streptomycin的DMEM/F12(3∶1)，加入10％FBS，50ng/mL表皮生长因子EGF，10ng/ml肝细胞生长因子HGF；(6)待细胞在培养板上长满后，用t ryps in-EDTA在37℃消化10～30分钟，用流式细胞术分选E-cad+细胞，收集猕猴成体肝脏前体细胞。