[发明专利]应用AS-PCR检测牛白细胞粘附缺陷的方法

摘要

本发明属于家畜分子检测技术领域，具体涉及应用AS-PCR方法在体外检测牛白细胞粘附缺陷的方法。制备了一种用于牛粘附缺陷检测方法的特异性PCR引物，它包括：CD18基因扩增引物：突变型扩增产物长度为500bp；引物1：5’AAGATGACGAGGAGCAGAA 3’，引物2：5’GTCCATCAGGTAGTACAGGC 3’；野生型扩增产物长度为818bp；引物3：5’CAAGGGCTACCCCATCGA 3’，引物4：5’CAGGACTGCGTGGCTAAA 3’。本发明制备的牛白细胞粘附缺陷的方法的特异性引物，可直接应用于在体外开展牛粘附缺陷的致病基因的筛选，以利于对牛粘附缺陷个体进行早期淘汰。

主权项

1.应用AS-PCR在体外检测牛白细胞粘附缺陷的方法，其步骤如下1)设计特异性引物对，该引物对的DNA序列如下所示：基因CD18的扩增引物：突变型：扩增产物长度为500bp，引物1，正向引物：5′AAGATGACGAGGAGCAGAA3′，引物2，反向引物：5′GTCCATCAGGTAGTACAGGC3′；野生型：扩增产物长度为818bp；引物3：5′CAAGGGCTACCCCATCGA3′，引物4：5′CAGGACTGCGTGGCTAAA3′；2)PCR过程如下：将同一份DNA样本使用2个20μL体系进行扩增：20μL体系包括10×Buffer2.0μL，25mMMg2+1.5μL，10μM用于AS-PCR反应的引物各0.5μL，10mMdNTP0.4μL，5U/μLTaq酶0.4μL，500ng/μLDNA1.0μLddH2O13.7μL，混匀、瞬时离心；PCR反应条件：94℃预热10min，94℃变性45s，65℃45s，72℃延伸45s，从第二步94℃变性到第四步72延伸进行35个循环，72℃延伸10min，15℃10min。然后各取3μLPCR产物混合点样，1.5％琼脂糖凝胶电泳检，并记录结果。