[发明专利]天然人源IgG Fab噬菌体抗体库的构建方法

摘要

本发明基因工程技术领域，具体涉及一种天然人源IgGFab噬菌体抗体库的构建方法。本发明以DNA重组技术从健康志愿者的外周血淋巴细胞中扩增出全套人抗体轻链及重链Fd基因，分别插入噬菌体载体pFabICN相应位置，构建高容量、高多样性的天然人源IgGFab噬菌体抗体库。经实验验证，该方法建立的噬菌体抗体库的库容可高达4×108，符合大容量抗体库标准，且包含全套人抗体轻链及重链Fd基因，具有高度的多样性。与其他噬菌体抗体库构建方法相比，该方法构建的抗体库具有高容量和高多样性的优点，可用于高通量筛选临床治疗用的低抗原性、高亲和性人源抗体。

主权项

一种天然人源IgG Fab噬菌体抗体库的构建方法，其特征在于具体步骤如下：（1）健康人外周血淋巴细胞分离及总RNA提取，通过RT‑PCR合成cDNA；（2）以cDNA为模板，用一组几乎覆盖人免疫球蛋白G（IgG）全部轻链可变区编码序列的特异性引物分别扩增人免疫球蛋白的轻链基因，得到几乎覆盖人免疫球蛋白G（IgG）的完整κ和λ轻链基因；（3）以cDNA为模板，用一组几乎覆盖人免疫球蛋白G（IgG）全部重链可变区编码序列的特异性引物分别扩增人免疫球蛋白的Fd重链基因，得到几乎覆盖人免疫球蛋白G（IgG）的γ重链Fd片段基因；（4）将获得的人免疫球蛋白G（IgG）的轻链基因与噬菌体载体连接，构建轻链抗体库；（5）将获得的人免疫球蛋白G（IgG）的Fd重链基因与轻链抗体库DNA连接，构建完整的人源IgG Fab噬菌体抗体库；（6）经过多轮的抗原亲和吸附—洗脱—扩增，最终筛选出抗原特异的抗体克隆，然后转化宿主使目标抗体表达；（7）对纯化的抗体进行生物活性与功能鉴定。