[发明专利]HLA高分辨基因测序试剂盒

摘要

本发明公开了一种人类白细胞抗原基因的分型方法，包括以下步骤：(1)按照常规技术提取待测基因组DNA，使用PCR扩增引物扩增所要分析的目的基因片段：HLA-A的2，3，4外显子，HLA-B的2，3，4外显子和HLA-DRB1位点2外显子；(2)使用测序引物对步骤(1)所得PCR产物进行扩增，扩增各外显子，然后对扩增出的各外显子进行测序，并将测序结果与数据库中的标准序列进行比较，从而确定基因分型结果；由于本发明HLA基因测序试剂盒以及测试条件的优化组合，有效地扩增HLA-A，B位点的2，3，4外显子和HLA-DRB1位点2外显子，并对相应外显子进行测序，因此在进一步进行分型时，能够避免当某几个等位基因核苷酸位于扩增区域之外时无法进行有效分型的问题，提高了对HLA基因分型的分辨率和精确性。

主权项

一种人类白细胞抗原基因的分型方法，包括以下步骤：(1)按照常规技术提取待测基因组DNA，使用PCR扩增引物扩增所要分析的目的基因片段；(2)使用测序引物对步骤(1)所得PCR产物进行扩增，扩增各外显子，然后对扩增出的各外显子进行测序，并将测序结果与数据库中的标准序列进行比较，从而确定基因分型结果；其特征在于，其中，步骤(1)中所述目的基因片段包括HLA‑A的2，3，4外显子，HLA‑B的2，3，4外显子和HLA‑DRB1位点2外显子；相应的PCR扩增引物对包括：HLA‑A位点扩增引物，HLA‑B位点扩增引物和HLA‑DRB1位点扩增引物；其中，所述HLA‑A位点扩增引物包括：正义引物，SEQ ID No.1：CCATTGGGTGTCGGGTTTC；反义引物，SEQ ID No.2：CAGCAATGATGCCCACGATG；所述HLA‑B位点扩增引物包括：正义引物1，SEQ ID No.3：CCCTGAGTTTCACTTCTTCTCCCA；正义引物2，SEQ ID No.4：CCACGAGTTTCACTTCTTCTCCCA；反义引物，SEQ ID No.5：CCAGCAACAATGCCCACGAT；所述HLA‑DRB1位点扩增引物包括：G1，SEQ ID No.6：TGTAAAACGACGGCCAGTTCTTGTGGCAGCTTAAGTT；G2，SEQ ID No.7：TGTAAAACGACGGCCAGTTCCTGTGGCAGCCTAAGAGG；G3，SEQ ID No.8：TGTAAAACGACGGCCAGTTCTTGGAGTACTCTACGT；G4，SEQ ID No.9：TGTAAAACGACGGCCAGTTCTTGGAGCAGGTTAAAC；G7，SEQ ID No.10：GTAAAACGACGGCCAGTTCCTGTGGCAGGGTAAGTATA；G8，SEQ ID No.11：TGTAAAACGACGGCCAGTTCTTGGAGTACTCTACGG；G9，SEQ ID No.12：TGTAATACGACGGCCAGTTCTTGAAGCAGGATAAGTT；G10，SEQ ID No.13：TGTAATACGACGGCCAGTTCTTGGAGGAGGTTAAGTT；R，SEQ ID No.14：CAGGAAACAGCTATGACCGCTCACCTCGCCGCTGCAC；R＊09，SEQ ID No.15：CAGGAAACAGCTATGACCGCTTACCTCGCCTCTGCAC；步骤(2)中，相应的测序引物包括：HLA‑A位点的第2、3、4外显子测序引物，HLA‑B位点的第2、3、4外显子测序引物和HLA‑DRB1位点的第2外显子测序引物；所述HLA‑A位点的第2外显子测序引物包括：A2F，SEQ ID No.16：CGGGGAGAAGCAASGG；A2R，SEQ ID No.17：CGGACCCGGAGACTGTG；所述HLA‑A位点的第3外显子测序引物包括：A3F，SEQ ID No.18：GGTTTCATTTTCAGTTTAGGC；A3R，SEQ ID No.19：TTGTCTCCCCTCCTTGTGG；所述HLA‑A位点的第4外显子测序引物包括：A4F，SEQ ID No.20：GGTGTCCTGTCCATTCTCAAG；A4R，SEQ ID No.21：CAGAGAGGCTCCTGCT；所述HLA‑B位点的第2外显子测序引物包括：B2F，SEQ ID No.22：CCCAGGCTCCCACTCCAT；B2R，SEQ ID No.23：GGGGAGTCGTGACCTGC；所述HLA‑B位点的第3外显子测序引物包括：B3F，SEQ ID No.24：GGCCAGGGTCTCACAC；B3R，SEQ ID No.25：GGCGACATTCTAGCGC；所述HLA‑B位点的第4外显子测序引物包括：B4F，SEQ ID No.26：AGATGCAAAGCGCCTGAA；B4R，SEQ ID No.27：GGCTCCTGCTTTCCCTGA；所述HLA‑DRB1位点的第2外显子测序引物包括：M13F，SEQ ID No.28：TGTAAAACGACGGCCAGT；M13R，SEQ ID No.29：CAGGAAACAGCTATGACC；Codon 86，SEQ ID No.30：CTGCACTGTGAAGCTCTCCA。